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            RTD6501 糖蛋白染色試劑盒
             產品貨號: RTD6501
             產品名稱: RTD6501 糖蛋白染色試劑盒
             產品價格/規格: 10次 1000元
             產品說明書: 點擊查看
             更新時間: 2022-03-22
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              產品編號

              規格

              運輸

              RTD6501

              10

              RT

              產品簡介:                                                

              本產品用于PAGE 凝膠或蛋白免疫印記硝酸纖維素膜上糖蛋白的檢測。整個染色2.5小時完成。染色后的糖蛋白為品紅色條帶,背景為淺粉色或者無色。該試劑盒檢測的靈敏度一般可以達到微克級別,但實際靈敏度跟靶蛋白糖基化程度相關,可以用于 SDS-PAGE 和2D電泳的凝膠檢測,也可以用于瓊脂糖凝膠電泳的檢測(但背景較高),還可以用于硝酸纖維素印跡膜的檢測。

              按照每次使用25 ml糖蛋白染色試劑計算,本產品可以染色 8-10塊mini-PAGE(8×10cm)膠或印跡膜。

              產品組成:

              產品編號

              產品名稱

              規格

              貯存

              運輸

              RTD6501-1

              氧化試劑

              2.5 g

              常溫避光

              RT

              RTD6501-2

              糖蛋白染色試劑

              250 ml

              常溫避光

              RT

              RTD6501-3

              還原試劑

              1.25 g

              常溫避光

              RT

              RTD6501-4

              陽性對照(辣根過氧化物酶)

              1 mg

              -20

              RT

              RTD6501-5

              陰性對照(大豆胰蛋白酶抑制劑)

              1 mg

              -20

              RT

              PL080

              5×MonoClolor 蛋白上樣緩沖液

              1 ml

              -20

              RT

              -

              250ml棕色塑料瓶

              2

              -

              -

              -

              說明書

              1

              -

              -

              儲存條件

              按照標簽溫度貯存,常溫運輸。開封后一年有效。

              ●實驗前準備:

              1. 配制 3%醋酸溶液:將 15 ml 自備的冰醋酸與 485 ml 超純水混勻,常溫保存備用。

              2. 配制 50%甲醇溶液:將 250 ml 甲醇與 250 ml 超純水混勻,常溫保存備用。

              3. 配制氧化試劑溶液: 將本試劑盒提供的氧化試劑干粉轉移到本試劑盒提供的250ml空塑料瓶中, 然后加入250 ml的超純水,充分混勻溶解后得到氧化試劑溶液,常溫保存備用。

              4. 配制還原試劑溶液: 將本試劑盒提供的還原試劑干粉轉移到本試劑盒提供的 250ml 空塑料瓶中,然后加入 250 ml的超純水,充分混勻溶解后得到還原試劑溶液,常溫保存備用。

              5. 配制1×SDS-PAGE上樣緩沖液:取0.4 ml 5×MonoClolor 蛋白上樣緩沖液,加入1.6 ml超純水,-20℃貯存備用。

              6. 配制陽性對照(辣根過氧化物酶)溶液:向裝有 1 mg 辣根過氧化物酶固體的棕色管中加入 1 ml 1×SDS-PAGE 上樣緩沖液,所得辣根過氧化物酶溶液的濃度即為 1mg/ml,然后適量分裝成8-10管, 留下一管當天使用, 其余的放-20℃長期保存。 對于 8×10 cm的凝膠來說,每條泳道加 10 μl 的陽性對照溶液即可,上樣前95℃處理5分鐘。

              7. 配制陰性對照(大豆胰蛋白酶抑制劑)溶液:向裝有 1 mg 大豆胰蛋白酶抑制劑干粉的管中加入 1×SDS-PAGE 上樣緩沖液(自備),所得大豆胰蛋白酶抑制劑溶液的濃度即為 1 mg/ml,然后適量分裝成8-10管, 留下一管當天使用,其余的放-20℃長期保存。對于 8×10 cm的凝膠來說,每條泳道加 10 μl 的陽性對照溶液即可,上樣前95℃處理5分鐘。

              8. 樣品稀釋:用 5×MonoClolor 蛋白上樣緩沖液將樣品濃度稀釋為 1 mg/ml,SDS-PAGE 上樣緩沖液終濃度為 1×。對于 8×10 cm的凝膠來說,每條泳道加 5-10 μl 的樣品即可,上樣前95℃處理5分鐘。。

              凝膠染色的操作步驟(膜染色從步驟3開始):

              注意事項:

              1.以下步驟僅針對0.75mm厚度大小8×10cm的凝膠,1-1.5mm厚度凝膠或更大體積凝膠適當增加液體體積并延長操作時間。

              2. 請在通風櫥中進行以下操作。

              . 固定:

              取出電泳后的 SDS-PAGE 凝膠,在50 ml 50%甲醇溶液中,搖床慢搖30分鐘,棄甲醇溶液。

              . 漂洗:

              50 ml超純水洗滌凝膠兩次,每次搖床慢搖10分鐘,棄超純水。

              . 氧化:

              凝膠中加入 25 ml 氧化試劑,搖床慢搖15分鐘,棄溶液。

              . 漂洗:

              50 ml超純水洗滌凝膠3次,每次搖床慢搖5分鐘,棄溶液。

              . 染色:

              凝膠中加入25 ml糖蛋白染色試劑,搖床慢搖15 分鐘,糖蛋白會在5-10分鐘內顯現品紅色。若檢測的糖蛋白含量較低,適當延長顯色時間。棄染色溶液。

              注:若糖蛋白染色試劑中有晶體析出,只需取上清液即可,不要加熱溶解晶體。

              染色步驟會產生有刺激性氣味氣體,請在通風櫥中操作。

              . 還原:

              凝膠中加入 25 ml 還原試劑,搖床慢搖15分鐘,棄溶液。此時凝膠背景略帶紅色。

              . 漂洗:

              加入50 ml 3%醋酸溶液搖床慢搖洗滌膠塊3次,每次10分鐘,直至膠背景紅色變淺,接近淡紅色或無色,此時紅色糖蛋白主帶清晰可見。

              . 保存:

              膠塊保存在50 ml 3%醋酸溶液中。

              實驗記錄表格

              實驗日期:

              編號

              步驟

              體積

              時間

               

               

              凝膠尺寸 8×10 cm

              0.75mm膠或膜

              1

              固定

              50 ml

              30 min

              膜從步驟3開始

              2

              漂洗

              2×50 ml

              2×10 min

              3

              氧化

              25 ml

              15 min

              4

              漂洗

              3×50 ml

              3×5 min

              5

              染色

              25 ml

              15 min或更長

              條帶變為品紅色

              6

              還原

              25 ml

              5 min

              7

              漂洗

              3×50 ml

              3×10 min

              漂洗后凝膠背景變淺

              8

              保存

              50 ml

              -

              實驗示例:



            • 使用該產品發表部分文章列表:

              1. [IF=8.947 Adhesive property and mechanism of silkworm egg glue protein.

              Author: Yutian Lei, Kaiyu Guo, Yan Zhang, Xiaolu Zhang, Lixia Qin, Xin Wang, Hongtao Zhu, Yuanyuan Guo, Wenxin Yang, Benchi Li Qingyou Xia, Ping Zhao, Zhaoming Dong

              Journal: Acta Biomaterialia. Volume 134, 15 October 2021, Pages 499-512

              Institution Southwest University

              Paper linkhttps://linkinghub.elsevier.com/retrieve/pii/S1742706121004773


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