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            ·PCR
             
             
             





            Bradford蛋白濃度測定試劑盒(去垢劑還原劑兼容型)
             產品貨號: RTP 7104
             產品名稱: Bradford蛋白濃度測定試劑盒(去垢劑還原劑兼容型)
             產品價格/規格: 1000次 300元
             產品說明書: 暫無
             更新時間: 2022-03-22
            詳細信息   訪問次數:

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              Bradford蛋白濃度測定試劑盒(去垢劑還原劑兼容型)


              試劑盒內容及保存:

              貨號

              產品名稱

              包裝

              貯存方式

              RTP7104-01

              考馬斯亮藍G-250 plus染色液

              200 ml

              4

               

              牛血清白蛋白(BSA)標準溶液(5 mg/ml

              2×1 ml

              -20

               

              PBS溶液

              10 ml

              4

               

              說明書

              1

               

              儲存條件和效期:

              考馬斯亮藍G-250染色液4℃避光保存;牛血清白蛋白標準溶液-20℃貯存。PBS溶液4℃貯存。本試劑盒有效期1年。

              產品簡介:

              Bradford蛋白質濃度測定試劑盒(去垢劑還原劑兼容型)是根據考馬斯亮藍G-250(Coomassie brilliant blue G-250)法研制而成,其原理是考馬斯亮藍G-250在酸性條件下和蛋白質結合,使得染料最大吸收峰從465nm變為595nm,在一定的線性范圍內,反應液595nm處吸光度的變化量與反應蛋白量成正比,測定595nm處吸光度的增加即可進行蛋白定量。該產品經過配方優化,兼容一定濃度的還原劑和去垢劑。

              每個試劑盒可以檢測1000個樣品(使用微孔板)或60個樣品(使用試管)

              產品特點:

              1. 檢測速度極快,10個樣品只需不足10分鐘即可完成。

              2. 靈敏度高,檢測濃度下限可達25μg/ml (測定濃度范圍在50-1000μg/ml內有較好的線性關系),最小檢測蛋白量可達0.5μg。

              3. 該試劑盒測定蛋白濃度不受絕大部分樣品中的化學物質的影響。樣品中β-巰基乙醇的濃度可高達1M,DTT的濃度可高達50 mM。同時,此方法測定蛋白濃度可以兼容受高濃度的去垢劑影響,可以適用于膜蛋白樣品的濃度測定。蛋白樣品中SDS濃度低于0. 1%,Triton X-100濃度低于1%,Tween 20, 60, 80濃度低于1%,NP-40濃度低于1%都可以定量。

              操作方法

              微孔板測定程序:(工作范圍25-1000 μg/ml

              1.  G-250染液在使用前應平衡溫度至室溫并溫和顛倒混勻;

              2.  1mg/ml蛋白標準品配制:室溫完全溶解蛋白標準品,取20μl 5mg/ml BSA蛋白標準溶液,加入80μl PBS溶液,使其終濃度為1 mg/ml。

              3.  按照下表配制BSA標準測定溶液:

              4.   

              編號

              0

              1

              2

              3

              4

              5

              6

              7

              8

               

              1 mg/ml BSA 標準溶液 μl

              BSA標準溶液 μl

              0

              0.5

              1.5

              2.5

              5.0

              7.5

              10

              15

              20

              PBS 溶液 μl

              20

              19.5

              18.5

              17.5

              15

              12.5

              10

              5

              0

              BSA終濃度 μg/ml

              0

              25

              75

              125

              250

              350

              500

              750

              1000

              總體積 μl

              20 μl

              5.  將適當體積的待測樣品加入到微孔板中,并用PBS補足到20 μl;

              6.  向微孔板中加入200 μl G-250染色液,混勻,室溫放置3-5分鐘;

              7.  測定595 nm 處的吸光值,并記錄讀數;以不含BSA 的樣品的光吸收值作為空白對照。

              8.  A595為縱坐標,BSA含量為橫坐標,繪制標準曲線,計算樣品中的蛋白濃度。如果所得到的蛋白濃度不在標準曲線范圍內,請稀釋樣品后重新測定。

              試管測定程序:(工作范圍25-1000 μg/ml

              1. G-250染液在使用前應平衡溫度至室溫并溫和顛倒混勻;

              2. 1mg/ml蛋白標準品配制:室溫完全溶解蛋白標準品,取100 μl 5mg/ml BSA蛋白標準溶液,加入400 μl PBS溶液,使其終濃度為1.0 mg/ml。

              3. 按照下表配制BSA標準測定溶液:

              編號

              0

              1

              2

              3

              4

              5

              6

              7

              8

               

              1 mg/ml BSA 標準溶液 μl

              BSA標準溶液 μl

              0

              2.5

              7.5

              12.5

              25

              35

              50

              75

              100

              PBS 溶液 μl

              100

              97.5

              92.5

              87.5

              75

              65

              50

              25

              0

              BSA終濃度 μg/ml

              0

              25

              75

              125

              250

              350

              500

              750

              1000

              總體積 μl

              100 μl

              4. 將適當體積的待測樣品加入到試管中,并用PBS補足到100 μl;

              5. 向試管中加入2 ml G-250染色液,混勻,室溫放置3-5分鐘;

              6. 測定595 nm 處的吸光值,并記錄讀數;以不含BSA 的樣品的光吸收值作為空白對照。

              7. A595為縱坐標,BSA含量為橫坐標,繪制標準曲線,計算樣品中的蛋白濃度。如果所得到的蛋白濃度不在標準曲線范圍內,請稀釋樣品后重新測定。


                References

              1.Bradford, M.M. (1976). A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding. Anal. Biochem. 72:248-54.


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