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            RTD6120 超低分子量蛋白電泳試劑盒
             產品貨號: RTD6120
             產品名稱: RTD6120 超低分子量蛋白電泳試劑盒
             產品價格/規格: 10次/1000元
             產品說明書: 點擊查看
             更新時間: 2022-03-22
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            • 超低分子量蛋白電泳試劑盒(貨號:RTD6120

              ●     產品組成:

              組分貨號

              組分

              名稱

              規格

              貯存

              運輸

              RTD6120-01

              組分1

              2×多肽電泳濃縮膠緩沖液

              15 ml

              4

              常溫

              RTD6120-02

              組分2

              2×多肽電泳分離膠緩沖液

              30 ml

              4

              常溫

              RTD6120-03

              組分3

              2×PAA溶液 超低濃縮膠用

              15 ml

              4

              常溫

              RTD6120-04

              組分4

              2×PAA溶液 超低分離膠用

              30 ml

              4

              常溫

              AP020P

              組分5

              10% APS(干粉)

              5 ml

              常溫

              常溫

              TA0761-01

              組分6

              TEMED

              0.5 ml

              常溫

              常溫

              CB010P

              組分7

              10×Tricine-Tris-SDS緩沖液(10×TTS)

              500 ml(干粉)

              常溫

              常溫

              TP050

              組分8

              2×Tricine 上樣緩沖液(含還原劑)

              1 ml

              -20

              常溫

              RTD6202-02

              組分9

              FastBlue蛋白染色液

              500 ml

              常溫

              常溫

              產品簡介:

              本試劑盒含有超低分子量蛋白電泳(多肽電泳)全套試劑,可以用來檢測1-20kd的多肽大小。本試劑盒可配制至少10塊常規大小的PAGE膠(8×10cm)。具有以下特點:

              1 適用范圍廣:2×多肽電泳緩沖液和2×PAA溶液中不含有SDS,適用于多肽的變性和非變性電泳。

              2 分辨率高:凝膠緩沖液獨特配方,可以有效分離1-5kD多肽。

              3 穩定性高:凝膠緩沖液pH為中性,存放時間長。

              4 使用方便:配制凝膠時只需1:1混合2×凝膠緩沖液和2×PAA溶液,加上APS和TEMED即可配制凝膠。

              貯存和效期:

              按照標簽溫度貯存;開封后有效期一年。

              使用說明:

              . 10% APS配制:

              10% APS配制-5 ml將APS干粉溶于5 ml滅菌水中,徹底溶解后分裝,1 ml/支,-20℃備存,每次取一管使用。10% APS應盡量減少常溫存放時間,以防失效。10%APS在4℃有效期為一周,-20℃有效期6個月。若發現凝膠聚合時間延長,應考慮更換使用-20度保存的10% APS。

              . 制膠:

              I 配制分離膠

              1.按照表一將不同體積的成分加入到小燒杯或離心管中混合;立即混勻5-10秒,以使溶液充分混勻。

              表一  (一塊1 mm mini膠用量)*

               

              分離膠

              濃縮膠

               

              18T /5 ml

              5T /2 ml

              2×多肽電泳濃縮膠緩沖液

              /

              1 ml

              2×多肽電泳分離膠緩沖液

              2.5 ml

              /

              2×PAA溶液 超低濃縮膠用

              /

              1 ml

              2×PAA溶液 超低分離膠用

              2.5 ml

              /

              10APS

              25-50 μl**

              20-30 μl

              TEMED

              2.5-5 μl

              2 μl

              注: * 如非必須,不要使用厚度1.5mm的凝膠,盡量使用厚度0.75m和1mm的凝膠,這樣會減少電泳后染色和脫色的時間。

              ** 凝膠的聚合時間與環境溫度有關。夏天溫度較高時,聚合較快;冬天氣溫低時,聚合時間會延長?梢愿鶕矶臉藴蕳l件調節催化劑的加入量。

              表二 超低凝膠制備凝固時間表

              環境溫度

              20

              25

               

              分離膠配制

              濃縮膠配制

              分離膠配制

              濃縮膠配制

              分離膠配制量

              5 ml

              -

              5 ml

              -

              濃縮膠配制量

              -

              2 ml

              -

              2 ml

              10%APS

              50 μl

              20 μl

              25 μl

              20 μl

              TEMED

              5 μl

              2 μl

              2.5 μl

              2 μl

              凝固時間

              5-10 分鐘

              20-30 分鐘

              5-10 分鐘

              20-30 分鐘

              2.在凝膠模具中迅速灌入適量分離膠溶液,然后在分離膠溶液上輕輕覆蓋一層1-3 cm的無水乙醇層,使凝膠表面保持平整。

              3.靜置5-10分鐘,待分離膠和乙醇層之間出現一個清晰的界面表示凝膠已聚合。

              II 配制濃縮膠

              去除覆蓋在分離膠上的水層,用濾紙將殘留的水吸去。

              1.按照表一將不同成分加入到小燒杯或離心管中混合;立即混勻5-10秒,以使溶液充分混勻。

              2.將梳子插入凝膠內,避免產生氣泡。

              3.靜置20-30分鐘待凝膠聚合

              . 電泳:

              1. 10×Tricine-Tris-SDS緩沖液配制:

              將10×Tricine-Tris-SDS緩沖液(10×TTS)粉末(Cat NoCB010P)置于一干凈的一升燒杯中,加入500ml超純水,徹底攪拌混勻,不要調節pH,即配成500ml 10×TTS緩沖液。

              表三 1×TTS緩沖液配制

               

              1×TTS配制量 500 ml

              1×TTS配制量 1000 ml

              10×TTS

              50 ml

              100 ml

              超純水

              450 ml

              900 ml

              注:伯樂Mini III電泳槽一次電泳使用500ml 1×TTS緩沖液。

              2. 樣品處理:

                待上樣的檢測樣品與2×Tricine上樣緩沖液[Cat NoTP050]等體積混合,75℃處理5-10分鐘后上樣。蛋白Marker一般已經含有上樣緩沖液,根據說明書上樣(預染Marker不能加熱處理,非預染Marker上樣前一般要75℃處理5-10分鐘)。

              將電泳槽的內槽加滿1×TTS緩沖液,輕柔拔出梳子,用1ml移液器將梳孔吹洗干凈,將Marker或蛋白樣品(已經過處理)加入點樣孔,穩壓電泳(表四),至藍色指示前沿至分離膠下沿位置時即可停止電泳。整個電泳過程大約需要2.5-3個小時。

              表四 多肽電泳條件

              恒電壓

              150V

              起始電流

              60-75mA/板膠

              結束電流

              15-25mA/板膠

              電泳時間

              2.5-3小時

              四. 染色(使用組分9-FastBlue蛋白染色液):

              用前必讀:

              1 使用前如發現瓶中有少許沉淀,請混勻后使用。

              2以下“使用方法”是針對0.75mm1.0 mm厚度,10×10cm凝膠染色程序。

              使用方法:

              1. 將電泳后的PAGE膠取下放入塑料容器中,加入適量染色液(以剛剛覆蓋過膠面為適),條帶1-2分鐘即可見。

              2. 搖床上常溫搖動10-15分鐘。

              3. 觀察結果。

              注意事項:

              1. 使用方法中的各種參數僅針對面積8×10cm或10×10cm,厚度0.75mm和1mm的凝膠,如果使用更大面積或更厚的凝膠,請加入更多的染色液并延長染色的時間。

              2. 常規染色所需的漂洗,固定,脫色步驟都無必要。

              3. 本染色液可以重復利用1-2次,敏感性會有輕微下降,請延長染色時間。

              4. 本染色液有輕微腐蝕性,請帶手套操作。使用后,請蓋好瓶蓋,常溫密封保存。

               緩沖液配方:

              1. 10x Tricine-Tris-SDS緩沖液 (1 L)    (Cat No:CB010P) 

              組分濃度:1 MTris,1 MTricine, 1% SDS

              Tris base 121.1 g

              Tricine    179.2 g

              SDS         10 g

              ddH2O      to1 L 

              Do not adjust the pH (~pH 8.3)


              2. 2×Tricine蛋白樣品加樣緩沖液(10ml)  (Cat No:TP050)

              組分濃度:100 mMTris-HCl, pH 6.8, 24% glycerol, 8% SDS,0.2MDTT,0.02% Coomassie Brilliant Blue G-250

              1ml 1MTris-Cl pH6.8

              2.4ml 甘油

              0.8g  SDS

              0.31gDTT

              2mg 考馬斯亮藍G-250

              用滅菌ddH2O定容至10ml

              混勻分裝-20℃貯存備用



              多肽電泳配套試劑

              名稱

              貨號

              規格

              超低分子量蛋白電泳試劑盒

              RTD6120

              10

              超低分子量蛋白Marker I3.3-20.1 kD

              RTD6101

              10次(100 μl

              超低分子量蛋白Marker III3.4-100 kD

              RTD6125

              10次(50 μl

              彩虹預染超低分子量蛋白Marker1.2-45 kD

              RTD6110

              10 50 μl

              彩虹預染超低分子量蛋白Marker II3-40 kD

              RTD6145

              10 50 μl

              50次(250 μl

              40% PAA19:1

              AC1914-01

              100ml

              40% PAA29:1

              AC2914-01

              100ml

              多肽電泳凝膠緩沖液

              GB010

              100ml

              10×Tris-Tricine-SDS電泳緩沖液(干粉型)

              CB010P

              500ml

              2×Tricine 上樣緩沖液

              TP050

              10×1ml

              FastBlue蛋白染色液

              RTD6202

              500ml

              乙二醇(電泳級)

              EA0582-02

              100 ml

              10×陽極緩沖液 (多肽電泳用

              AB080

              250 ml

              10×陰極緩沖液(多肽電泳用)

              CB010

              100 ml





            • 1. [IF=2.896] Rapid and sensitive detection of Staphylococcus aureus and Klebsiella pneumonia based on bacitracin-modified Fe3O4@PDA magnetic beads combined with matrix-assisted laser desorption ionization-time of flight mass spectrometry. 

              Author: Feng Qin,Xiangmin Zhang 

              Journal: Analytical Methods 2021,13,2804

              Institution Department of Chemistry, Fudan University,

              Paper link:https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/34075956/


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