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            ·PCR
             
             
             





            RTD6121超低分子量蛋白電泳試劑盒(非變性電泳)
             產品貨號: RTD6121
             產品名稱: RTD6121超低分子量蛋白電泳試劑盒(非變性電泳)
             產品價格/規格: 10次 1000元
             產品說明書: 點擊查看
             更新時間: 2022-03-22
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            • 超低分子量蛋白電泳試劑盒(非變性)(貨號:RTD6121)

              ●  產品組成:

              組分貨號

              組分

              名稱

              規格

              貯存

              運輸

              RTD6121-01

              組分1

              2×多肽電泳濃縮膠緩沖液

              15 ml

              4

              常溫

              RTD6121-02

              組分2

              2×多肽電泳分離膠緩沖液

              30 ml

              4

              常溫

              RTD6121-03

              組分3

              2×PAA溶液 超低濃縮膠用

              15 ml

              4

              常溫

              RTD6121-04

              組分4

              2×PAA溶液 超低分離膠用

              30 ml

              4

              常溫

              AP020P

              組分5

              10% APS(干粉)

              5 ml

              常溫

              常溫

              TA0761-01

              組分6

              TEMED

              0.5 ml

              常溫

              常溫

              CB020P

              組分7

              10×Tris-Tricine電泳緩沖液 (10×TT)

              500 ml(干粉)

              常溫

              常溫

              TP070

              組分8

              2×Tricine 上樣緩沖液(非變性,非還原)

              1 ml

              -20

              常溫

              RTD6202-02

              組分9

              FastBlue蛋白染色液

              500 ml

              常溫

              常溫

              產品簡介:

              本試劑盒含有超低分子量蛋白電泳(多肽電泳)全套試劑,可以用來檢測非變性條件下1-20 kd的多肽大小。本試劑盒可配制至少10塊常規大小的PAGE膠(8×10cm)。具有以下特點:

              1 配套試劑不含任何變性劑如SDS和還原劑如DTT或巰基乙醇,適用于非變性電泳。

                注:凝膠和電泳緩沖液pH8.3左右,非變性電泳適于檢測等電點小于8.3的蛋白,等電點近似或大于8.3的堿性蛋白不適合檢測。

              2 分辨率高:凝膠緩沖液獨特配方,可以有效分離1-5 kD多肽。

              3 使用方便:配制凝膠時只需1:1混合2×凝膠緩沖液和2×PAA溶液,加上APS和TEMED即可配制凝膠。

              貯存和效期:

              按照標簽溫度貯存;開封后有效期一年。

              使用說明:

              . 10% APS配制:

              10% APS配制-5 ml將APS干粉溶于5 ml滅菌水中,徹底溶解后分裝,1 ml/支,-20℃備存,每次取一管使用。10% APS應盡量減少常溫存放時間,以防失效。10%APS在4℃有效期為一周,-20℃有效期6個月。若發現凝膠聚合時間延長,應考慮更換使用-20度保存的10% APS。

              . 制膠:

              I 配制分離膠

              1.按照表一將不同體積的成分加入到小燒杯或離心管中混合;立即混勻5-10秒,以使溶液充分混勻。

              表一  (一塊1 mm mini膠用量)*

               

              分離膠

              濃縮膠

               

              18T /5 ml

              5T /2 ml

              2×多肽電泳濃縮膠緩沖液

              /

              1 ml

              2×多肽電泳分離膠緩沖液

              2.5 ml

              /

              2×PAA溶液 超低濃縮膠用

              /

              1 ml

              2×PAA溶液 超低分離膠用

              2.5 ml

              /

              10APS

              25-50 μl**

              20-30 μl

              TEMED

              2.5-5 μl

              2 μl

              注: * 如非必須,不要使用厚度1.5mm的凝膠,盡量使用厚度0.75m和1mm的凝膠,這樣會減少電泳后染色和脫色的時間。

              ** 凝膠的聚合時間與環境溫度有關。夏天溫度較高時,聚合較快;冬天氣溫低時,聚合時間會延長?梢愿鶕矶臉藴蕳l件調節催化劑的加入量。

              表二 凝膠制備凝固時間表

              環境溫度

              20

              25

               

              分離膠配制

              濃縮膠配制

              分離膠配制

              濃縮膠配制

              分離膠配制量

              5 ml

              -

              5 ml

              -

              濃縮膠配制量

              -

              2 ml

              -

              2 ml

              10%APS

              50 μl

              20 μl

              25 μl

              20 μl

              TEMED

              5 μl

              2 μl

              2.5 μl

              2 μl

              凝固時間

              5-10 分鐘

              20-30 分鐘

              5-10 分鐘

              20-30 分鐘

              2.在凝膠模具中迅速灌入適量分離膠溶液,然后在分離膠溶液上輕輕覆蓋一層1-3 cm的無水乙醇層,使凝膠表面保持平整。

              3.靜置5-10分鐘,待分離膠和乙醇層之間出現一個清晰的界面表示凝膠已聚合。

              II 配制濃縮膠

              去除覆蓋在分離膠上的乙醇層,用濾紙將殘留的乙醇吸去。

              1.按照表一將不同成分加入到小燒杯或離心管中混合;立即混勻5-10秒,以使溶液充分混勻。

              2.將梳子插入凝膠內,避免產生氣泡。

              3.靜置20-30分鐘待凝膠聚合

              . 電泳:

              1. 10×Tris-Tricine緩沖液配制:

              將10×Tris-Tricine緩沖液(10×TT)粉末(Cat NoCB020P)置于一干凈的一升燒杯中,加入500ml超純水,徹底攪拌混勻,不要調節pH,即配成500ml 10×TT緩沖液。

              表三 1×TT緩沖液配制

               

              1×TT配制量 500 ml

              1×TT配制量 1000 ml

              10×TT

              50 ml

              100 ml

              超純水

              450 ml

              900 ml

              注:伯樂Mini III電泳槽一次電泳使用500ml 1×TT緩沖液。

              2. 樣品處理:

                待上樣的檢測樣品與2×Tricine上樣緩沖液(非變性,非還原)[Cat NoTP070]等體積混合,不要加熱,上樣。蛋白Marker選擇非變性專用Marker,根據說明書使用。將電泳槽的內槽加滿1×TT緩沖液,輕柔拔出梳子,用1ml移液器將梳孔吹洗干凈,將Marker或蛋白樣品(已經過處理)加入點樣孔,穩壓電泳(表四),至藍色指示前沿至分離膠下沿位置時即可停止電泳。整個電泳過程大約需要2.5-3個小時。                   

              表四 多肽電泳條件

              恒電壓

              150V

              起始電流

              60-75mA/板膠

              結束電流

              15-25mA/板膠

              電泳時間

              2.5-3小時

              . 染色(使用組分9-FastBlue蛋白染色液):

              4.1 將電泳后的PAGE膠取下放入塑料容器中,蒸餾水漂洗一次;棄水,加入適量染色液(以剛

              剛覆蓋過膠面為適),條帶1-2分鐘即可見。

              4.2 搖床上常溫搖動10-15分鐘至條帶清晰;觀察結果。



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