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            RTD9101 蛋白濃縮試劑盒
             產品貨號: RTD9101
             產品名稱: RTD9101 蛋白濃縮試劑盒
             產品價格/規格: 50次 300元
             產品說明書: 點擊查看
             更新時間: 2022-03-22
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               TCA蛋白濃縮試劑盒(目錄號:RTD9101


              試劑盒內容及保存:TCA Protein Precipitation Kit

              貨號

              產品名稱

              規格

              貯存

              RTD9101-01

              試劑A-沉淀溶液

              10 ml

              RT

              RTD9101-02

              試劑B-漂洗溶液

              30 ml

              RT

              RTD9101-03

              試劑C-助沉劑

              5 ml

              RT

              RTD9101-04

              試劑D-中和液

              250 μl

              RT

              RTD9101-05

              1 M NaCl

              1 ml

              RT

              RTD9101-06

              1×SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液(變性,還原)

              1 ml

              -20℃

              RTD9101-07

              40 mM碳酸鈉

              1 ml

              RT

               

              說明書

              1

               

              儲存條件和效期:

              試劑盒常溫運輸;收到后,按照標簽溫度貯存;本試劑盒有效期1年。

              產品簡介:

              試劑盒原理:在酸性條件下,三氯乙酸(Trichloroacetic acid,TCA)與蛋白質形成不溶性鹽,使蛋白質變性導致構象發生改變,蛋白暴露出較多的疏水性基團,蛋白發生聚集而沉淀。為了避免TCA對后續電泳的影響,沉淀的蛋白要使用洗滌液徹底清洗去除TCA。濃縮后的蛋白可以用于SDS-PAGE和Western blot 前的蛋白樣品處理。

              以每次濃縮800 μl蛋白樣品計算,本試劑盒可以使用40-45次。

              操作方法:

              1.  準備1.5 ml干凈的離心管,加入800 μl蛋白樣品溶液。

              可選:如果樣品溶液中離子強度低于10mM,補加8 μl的1M NaCl溶液。

              低于800 μl的樣品,加入8 μl 1M NaCl,用水補齊體積至800 μl,使NaCl終濃度為10mM。

              2. 加入80 μl 試劑C-助沉劑,混勻,常溫靜置15分鐘。

              注:加入試劑C后溶液變渾濁。

              3.  加入步驟2溶液1/4體積的試劑A -220 μl,渦旋震蕩10-30秒,使之充分混勻。

              4.  冰浴放置15分鐘。

              5. 4℃,12000 rpm(13000 g)離心10 分鐘。 注:離心后白色蛋白沉淀彌散性可見于離心管管壁上。

                                 左為加入助沉劑;右沒有加入助沉劑

              6.  小心去掉上清液,保留沉淀。

              注:請小心操作,可以用移液器輔助徹底吸棄上清。

              7.  沉淀中加入600 μl試劑B,渦旋震蕩10-30秒,徹底混勻。

                 注:試劑B有刺激性氣味,請在通風櫥內操作。

              8.  冰浴15分鐘。

              9. 4℃,12000 rpm(13000 g) 離心10分鐘;在通風櫥中,倒掉上清。殘留上清用10 μl吸頭徹底吸棄,沉淀物通風晾干30-60秒。注:沉淀不能過分干燥,否則將導致蛋白不好溶解。

              10. 蛋白溶解:

              根據下表選擇溶解緩沖液:

              下游實驗

              溶解緩沖液

               

              備注

              SDS-PAGE電泳

              1×SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液(變性,還原)

              試劑盒提供

              加入溶解緩沖液后,徹底溶解沉淀(37℃溫浴處理),溶液正常顏色應為藍色;如果溶液為淡綠色或黃色,加入1/10體積中和液D,使顏色變回藍色。 95℃ 處理5分鐘,電泳上樣

              BCA蛋白定量

              40mM 碳酸鈉pH11.25

              試劑盒提供

              BCA蛋白定量試劑盒測定蛋白濃度

              等電聚焦IEF/2D電泳

              7M尿素,2M硫脲,40mM Tris,1%C7B2O1% ASB-14 pH10.4

              試劑盒不提供

               

              酶切實驗

              100 mM碳酸氫銨 pH8.5

              試劑盒不提供

               

              實驗示例:



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