該產品已經停產，替代產品RTD6132 RealPAGE plus彩色凝膠快速制備試劑盒

RealPAGE Color Gel Fast Preparation KitRealPAGE彩色凝膠快速制備試劑盒

●  貨品規格：

●  貨品內容：

● 產品簡介：

該產品利用聚丙烯酰胺凝膠電泳原理，采用合理設計的預混合配方和配制流程，可在15-30分鐘內配制得到高質量的聚丙烯酰胺凝膠，用于變性和非變性蛋白凝膠電泳。本產品可以配制常用分離膠濃度6%、8%、10%、12%和15%，可以滿足絕大多數蛋白電泳需求。

本試劑盒大約可以配制60-125塊常規大�。�8×10cm）PAGE凝膠，具體數量根據凝膠厚度決定：0.75mm厚度凝膠可以配制125塊膠，1mm厚度凝膠可以配制至少90塊膠，1.5mm厚度凝膠可以配制至少60塊膠。

● 運輸和貯存：

本產品常溫運輸；組份按照標簽溫度貯存；有效期一年。

● 特點：

1. 方便：彩色上層膠，方便上樣；上層膠溶液和下層膠溶液1:1混合，無需計算；

2. 快速：如采用一步法制膠，可以在15分鐘內準備好凝膠。

3. 安全：不用接觸有毒粉末；無需單獨添加有異味的TEMED。

4. 兼容性廣：制膠溶液中不含SDS，可用于非變性電泳（Native-PAGE）；

● 使用說明：

一.  凝膠制備：

1.1 根據下表參考選擇合適的凝膠濃度

表一不同濃度的PAGE下層膠的最佳分離范圍

1.2 分步法凝膠制備：

1.2.1 取等體積下層膠溶液B 和下層膠溶液A， 

各2.0/2.5/4.0 ml，混勻；

1.2.2混合溶液中加入 40/50/80 μl的促凝劑，輕輕混勻，將混勻后的溶液注入制膠玻璃板中，使液面和短玻璃板上沿之間的距離比梳齒長0.5 cm即可；注意：此溶液為過量，請勿全部注入。

1.2.3 沿玻璃板緩慢加入適量滅菌水或無水乙醇覆蓋于下層膠之上，待下層膠凝固后，倒去上層水或乙醇；注意：當水(乙醇)和膠之間有一條折射線時，說明膠已凝固；25℃時3-5分鐘可以聚合。

1.2.4 取等體積上層膠溶液B和上層膠聚合溶液A，各0.5/0.75/1.0 ml，混勻；

1.2.5向混合溶液中加入 10/15/20 μl 的促凝劑，輕輕混勻，插入梳齒；

1.2.6 待上層膠凝固后，拔去梳齒即可用于電泳。

注：凝膠的聚合時間與環境溫度有關。夏天溫度較高時，聚合較快；冬天氣溫低時，聚合時間會延長（參見表二）。

表二 上層膠不同溫度下凝固時間參考表

1.3 一步法凝膠制備：

1.3.1 取等體積下層膠溶液B 和下層膠溶液A，各2.0/2.5/4.0 ml，混勻；

1.3.2取等體積上層膠溶液B和上層膠溶液A，各0.5/0.75/1.0 ml，混勻；

1.3.3向步驟1.3.1的混合溶液中加入 40/50/80 μl的促凝劑，輕輕混勻，將混勻后的溶液注入制膠玻璃板中，使液面和短玻璃板上沿之間的距離比梳齒長0.5 cm即可；注意：此溶液為過量，請勿全部注入。

1.3.4 向步驟1.3.2 的混合溶液中加入10/15/20 μl 的促凝劑，輕輕混勻，無需等待下層膠凝固，即可將混勻后的溶液輕緩注入制膠玻璃板中，插入梳齒； 注意：灌注上層膠溶液一定要輕緩，

避免將上層膠溶液沖入下層膠。

1.3.5 待上層膠凝固后，拔去梳齒即可進行電泳。

注1：凝固后上下層膠分界線平整度略弱于分步法配制的凝膠，但對后續電泳沒有影響。

注2：凝膠的聚合時間與環境溫度有關。夏天溫度較高時，聚合較快；冬天氣溫低時，聚合時間會延長（參見表二）。

二.  電泳：

2.1 SDS-PAGE變性電泳：

2.1.1電泳緩沖液配制：

5×Tris-甘氨酸-SDS電泳緩沖液配制方法：

用前將5×Tris-甘氨酸-SDS電泳緩沖液稀釋5倍即配成1×Tris-甘氨酸-SDS電泳緩沖液。

2.1.2 樣品處理：融化-混合-變性-上樣

5×蛋白上樣緩沖液（變性，還原）（自備，貨號:PL080）常溫數分鐘解凍后輕輕搖勻，以確保溶液混合均勻；將緩沖液與蛋白樣品按照1:4的比例混勻，如2 μl 5×上樣緩沖液加8 μl樣品混合；將蛋白樣品置于95℃中加熱5-10分鐘；蛋白樣品加入凝膠加樣孔內電泳。

2.1.3 電泳過程；

在電泳槽的內槽內加入1×Tris-甘氨酸-SDS電泳緩沖液(讓電泳緩沖液漫過加樣孔)，輕輕的撥出梳子，用1ml吸頭徹底沖洗加樣孔，隨后在電泳槽外槽加入適量的1×Tris-甘氨酸-SDS電泳緩沖液，按照表三條件電泳。

表三 SDS-PAGE電泳條件

2.2 非變性電泳（Native PAGE）：

2.2.1電泳緩沖液配制：

5×Tris-甘氨酸電泳緩沖液配制方法：

用前將5×Tris-甘氨酸電泳緩沖液稀釋5倍即配成1×Tris-甘氨酸電泳緩沖液。

2.2.2 樣品處理：融化-混合-上樣

5×非變性非還原蛋白上樣緩沖液（自備，貨號:PL111）常溫數分鐘解凍后輕輕搖勻，以確保溶液混合均勻；將緩沖液與蛋白樣品按照1:4的比例混勻，如2 μl 5×上樣緩沖液與8 μl樣品混合；蛋白樣品加入凝膠加樣孔內電泳。注：非變性電泳樣品不能加熱處理。

2.2.3 電泳過程；

在電泳槽的內槽內加入1×Tris-甘氨酸電泳緩沖液(讓電泳緩沖液漫過加樣孔)，輕輕的撥出梳子，用1 ml吸頭徹底沖洗加樣孔，隨后在電泳槽外槽加入適量的1×Tris-甘氨酸電泳緩沖液，按照表四條件電泳。

表四 Native PAGE電泳條件

三. 染色：

1. 將電泳后的PAGE膠取下放入塑料容器中，加入適量FastBlue蛋白染色液（以剛剛覆蓋過膠面為適），條帶1-2分鐘（蛋白含量在2 μg以上）即可見。

2. 搖床常溫搖動10-15分鐘至條帶清晰可見。

3. 加入適量蒸餾水脫色，期間更換1-2次蒸餾水，搖床常溫搖動10-15分鐘至背景干凈。

4. 觀察保存結果。

四. 實驗示例：

                                     8%膠非變性電泳 1×TG 200V 37-14mA 50min   

10%膠變性電泳 1×TGS  200V 37-14mA 50min