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            RTD6136 Blue/Clear 非變性凝膠電泳試劑盒(適用于伯樂電泳槽) 停產
             產品貨號: RTD6136
             產品名稱: RTD6136 Blue/Clear 非變性凝膠電泳試劑盒(適用于伯樂電泳槽) 停產
             產品價格/規格:
             產品說明書: 點擊查看
             更新時間: 2022-06-07
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            •    Blue/Clear 非變性凝膠電泳試劑盒

                 Blue/Clear Native PAGE Electrophoresis Kit 

              貨號

              名稱

              包裝

              RTD6136

              Blue/Clear 非變性凝膠電泳試劑盒

              (適用伯樂電泳槽)

              10

              貨品內容:

              組份

              貨號

              名稱

              規格

              保存

              1

              RTD6135-0312

              3-12% RealPAGE Native BN/CN 預制膠(12 )

              (適用伯樂電泳槽)

              10

              4

              2

              BC500P

              10×BN/CN PAGE電泳緩沖液(干粉)

              500 ml

              RT

              3

              PL114

              4×BN/CN-PAGE蛋白上樣緩沖液

              1 ml

              -20

              4

              BC250

              0.4% G-250染料(電泳用)

              100 ml

              4

              5

              BC260

              5% G-250染料(上樣用)

              1 ml

              4

              6

              說明書

              一份

              產品簡介:

              Blue/Clear Native PAGE(BN/CN-PAGE)是一種從生物樣品(質膜,胞漿等)中分離分子量10 kD-10 M kD 范圍的蛋白質復合物的電泳技術。其原理是用溫和去污劑(如 DDM,digitonin)將蛋白復合體從細胞膜中以近似天然的狀態分離出來,Blue Native PAGE (BN-PAGE)是用考馬斯亮藍 G-250 代替 SDS與蛋白結合而使其帶負電荷,根據蛋白分子量不同在 PAGE膠中得到分離;Clear Native PAGE(CN-PAGE)是電泳緩沖液中不加入任何染料,電泳中始終保持蛋白的天然電荷和活性狀態,然而,其蛋白的分辨率要低于Blue Native PAGE。另外,BN-PAGE由于考馬斯亮藍G-250存在,使蛋白都覆蓋上負電荷,可以分離堿性蛋白(pI>7);而CN-PAGE只適合于酸性蛋白(pI<7)的分離。

              本產品包括BN/CN-PAGE制膠的所有成分,方便使用?梢杂糜诜蛛x分子量在 10 kD-10M kD 的蛋白復合體,樣品可以來于胞漿、細胞總裂解液、細胞膜、線粒體膜和葉綠體膜等。電泳后可直接用于考染、銀染、Western 雜交、SDS-PAGE電泳、蛋白純化、蛋白活性檢測等分析實驗,也可直接用于電洗脫制備蛋白。

              ● 運輸和貯存:

              本產品常溫運輸;組份按照標簽溫度貯存;有效期一年。

              使用說明:

              1. 樣品制備:

                 該試劑盒不含樣品制備的相關試劑,樣品具體制備方法參考Blue Native PAGE. Wittig I, Braun H, Schagger H. Nature Protocols. Vol 1,No 1,418,2006.

              2. 電泳:

              2.1 拆開預制膠包裝,將預制膠安裝在合適的電泳槽中。

              注:試劑盒配套預制膠兼容伯樂Mini IIIMini-PROTEAN Tetra Cell,天能VE-180,六一24K系列電泳槽。

              不兼容Thermol,六一其他系列,君意東方JYCZ2/4,百晶等電泳槽。

              2.2 準備電泳緩沖液:

              將10×BN/CN PAGE電泳緩沖液(干粉)溶于500 ml滅菌水中,徹底溶解,測定pH應為7.0左右,不要調節pH。用前稀釋10倍即配成1×BN/CN PAGE電泳緩沖液。

              2.2.1 CN-PAGE電泳:

              陽極緩沖液和陰極緩沖液均直接使用1×BN/CN PAGE電泳緩沖液進行電泳。

              2.2.2 BN-PAGE電泳:

              陽極緩沖液使用1×BN/CN PAGE電泳緩沖液,陰極緩沖液按照下表配制:

               

              1×藍色陰極緩沖液

               

              150 ml

              10×BN/CN PAGE電泳緩沖液

              15 ml

              0.4% G-250 染料(電泳用)

              0.75 ml

              超純水

              定容至150 ml

              2.3準備樣品:

              2.3.1 CN-PAGE電泳:

              總體積

              10 μl

              蛋白樣品

              x μl

              4×BN/CN-PAGE蛋白上樣緩沖液

              2.5 μl

              超純水

              補至10 μl

               

              不要加熱

              2.3.2 BN-PAGE電泳:

              注:以下以植物類囊體膜蛋白電泳為例。

              總體積

              10 μl

              10 μl

               

              含去垢劑樣品*

              不含去垢劑樣品

              植物類囊體膜蛋白樣品(DM復溶)

              x μl

              x μl

              4×BN/CN-PAGE蛋白上樣緩沖液

              2.5 μl

              2.5 μl

              5% G-250染料(蛋白上樣)

              0.25-1 μl

              0.1 μl(終濃度0.05%

              超純水

              補至10 μl

              補至10 μl

               

              不要加熱

              不要加熱

               

               

               

               

               

               

              * 含去垢劑樣品中染料加入按照以下原則:

              樣品中G250終濃度為去垢劑終濃度的1/4。

              例如樣品中DDM終濃度為1%,則需要G-250終濃度為0.25%。10 μl蛋白樣品中需要加5% G-250染料0.5 μl。

              2.4電泳過程;

              2.4.1 CN-PAGE電泳:

              電泳內外槽均使用1×BN/CN PAGE電泳緩沖液。在電泳槽的內槽內加入1×BN/CN PAGE電泳緩沖液(讓電泳緩沖液漫過加樣孔),輕輕撥出預制膠梳子,用1ml吸頭沖洗加樣孔3次,隨后在電泳槽外槽加入適量的1×BN/CN PAGE電泳緩沖液。

              CN-PAGE電泳

              恒電壓

              起始電流

              結束電流

              電泳時間

              120V

              10-15mA/板膠

              4-10mA/板膠

              50+min

              注:冰浴電泳

              2.4.2 BN-PAGE電泳:

              BN-PAGE電泳外槽使用1×BN/CN電泳緩沖液;內槽開始電泳使用的是1×藍色陰極緩沖液,冰浴電泳,等待電泳指示前沿到達凝膠1/3處時,將電泳緩沖液更換為1×BN/CN電泳緩沖液,繼續后續電泳,因為過多染料會影響蛋白在凝膠中的遷移以及蛋白后續的轉膜實驗。


              BN-PAGE電泳條件(一板膠)

              恒電流

              起始電壓

              電泳時間

              緩沖液

               

              10 mA

              80-110 V

              20-25 min

              1×藍色陰極緩沖液

              冰浴電泳

              指示前沿至凝膠三分之一處,更換內槽緩沖液為1×BN/CN 電泳緩沖液





              恒電流

              繼續電泳時間

              結束電壓

              電泳總時間

              緩沖液

               

              10 mA

              60-70 min

              不要超過500 V

              1.5- 2 h

              1×BN/CN電泳緩沖液

              冰浴電泳

              3. 轉膜:

              BN-PAGE轉膜必須用PVDF膜,不能用NC膜,因為NC膜與G-250結合非常緊密。

              轉膜緩沖液使用1×BN/CN PAGE電泳緩沖液即可。

              4. 染色:

              4.1 將電泳后的PAGE膠取下放入塑料容器中,加入適量FastBlue蛋白染色液或常規考馬斯亮藍染色液(以剛剛覆蓋過膠面為適),條帶1-2分鐘即可見。

              4.2 搖床常溫搖動10-15分鐘至條帶清晰可見。

              4.3 加入適量蒸餾水脫色,期間更換1-2次蒸餾水,搖床常溫搖動10-15分鐘至背景干凈。

              4.4 觀察保存結果。

              5. 實驗示例:



              4.5 實驗示例:





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