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            RTD6131 堿性蛋白非變性PAGE凝膠制備及電泳試劑盒
             產品貨號: RTD6131
             產品名稱: RTD6131 堿性蛋白非變性PAGE凝膠制備及電泳試劑盒
             產品價格/規格: 50次 500元
             產品說明書: 點擊查看
             更新時間: 2022-04-19
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              10×堿性蛋白Native PAGE轉膜緩沖液

              堿性蛋白非變性電泳蛋白Marker


              堿性蛋白非變性PAGE凝膠制備及電泳試劑盒(貨號:RTD6131

                                                  Basic Protein Native PAGE Gel Preparation and Electrophoresis Kit

              產品組成:

              貨號

              名稱

              規格

              保存條件

              AC2913-01

              30%PAA(29:1)

              100 ml

              4,避光

              RTD6131-02

              4×堿性蛋白分離膠緩沖液 pH4.3

              100 ml

              4

              RTD6131-03

              4×堿性蛋白濃縮膠緩沖液 pH6.8

              30 ml

              4

              RTD6131-04

              100×分離膠促凝劑

              2.5 ml

              -20

              AP020P

              APS(干粉)

              0.5 g

              RT

              TA0761-01

              TEMED

              0.5 ml

              4,避光

              PL110

              甲基綠上樣緩沖液

              1 ml

              -20

              TG160P

              堿性蛋白電泳緩沖液(干粉)

              1 L

              RT

              產品簡介:

              本公司提供的試劑盒包含堿性蛋白凝膠制備及電泳所需的全部試劑,用戶只需自備制膠器具和蒸餾水。本試劑盒可用于配制堿性蛋白非變性(native)PAGE凝膠。本試劑盒可配制30-50塊常規大小的非變性PAGE膠。

              各種蛋白質分子由于所含的堿性氨基酸和酸性氨基酸的數目不同,因而有各自的等電點。凡堿性氨基酸含量較多的蛋白質稱為堿性蛋白質,等電點偏堿性,如組蛋白、精蛋白等。反之,凡酸性氨基酸含量較多的蛋白質,等電點就偏酸性。分離堿性蛋白時候,要利用低 pH 凝膠系統,分離酸性蛋白時候,要利用高 pH 凝膠系統。酸性蛋白通常在非變性凝膠電泳中采用的 pH 是 8.8的緩沖系統,蛋白會帶負電荷,蛋白會相陽極移動;而堿性蛋白通常電泳是在微酸性環境下進行,蛋白帶正電荷,這時候需要將陰極和陽極倒置才可以電泳。

              特別說明:由于本系統采用非連續凝膠系統,分離膠pH為4.3,因此要求待分離的蛋白等電點pI>7.0,這樣堿性蛋白在酸性凝膠系統內帶正電荷,在凝膠電泳中才能正常向陰極泳動。如果待分離的蛋白等電點pI<7.0,請選擇非連續Laemmli活性凝膠系統分離(貨號:RTD6130)。

              使用說明:

              配制分離膠

              根據目的蛋白的分子量大小選擇合適的凝膠濃度(表一),配制非變性PAGE的分離膠。


              表一 不同濃度的PAGE分離膠的最佳分離范圍

              PAGE分離膠濃度

              最佳分離范圍

              6%

              50-150kD

              8%

              30-90kD

              10%

              20-80kD

              12%

              12-60kD

              15%

              10-40kD



              配制分離膠前,根據以下配方準備10% APS:

              10% APS配制-5 ml

              將0.5 gAPS干粉溶于5 ml滅菌水中,徹底溶解后分裝,1 ml/支,-20℃備存,每次取一管使用。10% APS應盡量減少室溫存放時間,以防失效。10%APS在4℃有效期為一周,-20℃有效期6個月。若發現凝膠聚合時間延長,應考慮更換使用-20度保存的10% APS。

              制備分離膠步驟:

              1.參照凝膠模具說明書,裝配好凝膠模具。

              2.根據下表,將不同體積的成分在小燒杯或試管中混合,輕輕攪拌使其混勻,避免產生氣泡


              3.在凝膠模具中灌入適量分離膠溶液(對于mini-gel,凝膠液加至約距前玻璃板頂端1.5 cm或距梳齒約0.5 cm即可),然后在分離膠溶液上輕輕覆蓋一層1-5 cm的水層,使凝膠表面保持平整。

              4.靜置15-30分鐘,待分離膠和水層之間出現一個清晰的界面后,說明凝膠已聚合。

              注:凝膠的聚合時間與環境溫度有關。夏天溫度較高時,聚合較快;冬天氣溫低時,聚合時間會延長?梢愿鶕h境溫度的不同調節APS的加入量。


              濃縮膠制備:

              1.去除覆蓋在分離膠上的水層。

              2.按照表一將不同成分在一個小燒杯或試管中混合,輕輕攪拌使其混勻,避免產生氣泡。

              3.將濃縮膠溶液加至分離膠的上面,直至凝膠溶液到達前玻璃板的頂端。

              4.將梳子插入凝膠內,避免產生氣泡。

              5.靜置30-60分鐘,等待濃縮膠聚合。

              注:凝膠的聚合時間與環境溫度有關。夏天溫度較高時,聚合較快;冬天氣溫低時,聚合時間會延長?梢愿鶕h境溫度的不同調節APS的加入量。

              電泳:

              凝膠凝固好后,根據以下配方準備電泳緩沖液。

              堿性蛋白電泳緩沖液的配制-1 L:將5×堿性蛋白電泳緩沖液干粉全部倒入1L燒杯中,加入約900 ml水徹底溶解,加入冰醋酸11ml,用水定容至1 L,即配成5×堿性蛋白電泳緩沖液(此溶液pH值約為4.4)。

              將5×堿性蛋白電泳緩沖液稀釋5倍即配成1×堿性蛋白電泳緩沖液。在電泳槽的內槽內加入1×堿性蛋白電泳緩沖液(讓電泳緩沖液漫過加樣孔),輕輕的撥出梳子,沖洗加樣孔,隨后在電泳槽外槽加入適量的1×堿性蛋白電泳緩沖液。上樣,把電泳電源的電源線互換,即紅色的陽極電極查到陰極孔,黑色的陰極電極插到陽極孔,按照表四條件,電泳,等指示前沿甲基綠電泳到分離膠下緣后,結束電泳,染色或者進行下一步實驗。     

              表四 堿性蛋白電泳條件

              恒電壓

              150V

              起始電流

              30-40mA/板膠

              結束電流

              10-20mA/板膠

              電泳時間

              40-45分鐘








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