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            RTD6122 RealPAGE Tricine蛋白預制膠(用于多肽電泳) 停產
             產品貨號: RTD6122
             產品名稱: RTD6122 RealPAGE Tricine蛋白預制膠(用于多肽電泳) 停產
             產品價格/規格:
             產品說明書: 暫無
             更新時間: 2022-03-22
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              RealPAGE Tricine蛋白預制膠

                     RealPAGE Tricine Protein Precast Gels    

              貨品內容:

              組份

              貨號

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              RTD6122

              18% RealPAGE Tricine蛋白預制膠(12 孔)

              10

              4

              2

              CB010P

              10×Tris-Tricine-SDS電泳緩沖液(干粉)

              500 ml

              RT

              3

              TP050

              2×Tricine多肽上樣緩沖液

              1 ml

              -20

              4

              說明書

              一份

              產品簡介:

              RealPAGE Tricine蛋白預制膠可以用來檢測1-40 kd的多肽大小。包裝里含有電泳緩沖液和上樣緩沖液,方便使用。蛋白預制膠采用獨特配方,不含SDS,可以進行非變性電泳(需要去除電泳緩沖液和上樣緩沖液中的SDS和還原劑)。

              預制膠玻璃板尺寸10×8.2 cm,凝膠尺寸8.3×7.5 cm,凝膠厚度1.1 mm,梳子12齒,最大上樣體積30 μl,兼容伯樂電泳槽。

              該產品配套膠板和緩沖液可以進行10板電泳。

              ● 運輸和貯存:

              本產品常溫運輸;4-8℃貯存,不能冷凍;有效期3個月。

              使用說明:

              . 安裝凝膠:

              拆開預制膠包裝,將預制膠安裝在合適的電泳槽中。

              . 電泳緩沖液配制:

              10×Tricine-Tris-SDS緩沖液配制:

              將10×Tricine-Tris-SDS緩沖液(10×TTS)粉末(Cat:CB010P)置于一干凈的一升燒杯中,加入500ml超純水,徹底攪拌混勻,不要調節pH,即配成500ml 10×TTS緩沖液。用前按照下表稀釋10倍配成1×TTS緩沖液。

               

              1×TTS配制量 500 ml

              10×TTS

              50 ml

              超純水

              450 ml

              注:伯樂Mini III電泳槽一次電泳使用500 ml 1×TTS緩沖液。

              . 樣品處理:

                    待上樣的檢測樣品與2×Tricine上樣緩沖液[Cat:TP050]等體積混合,75處理5-10分鐘后上樣。蛋白Marker一般已經含有上樣緩沖液,根據說明書上樣(預染Marker不能加熱處理,非預染Marker上樣前一般要75處理5-10分鐘)。

              . 電泳:

              4.1 將電泳槽的內槽加滿1×TTS緩沖液,輕柔拔出梳子,用1ml移液器將梳孔吹洗干凈,將Marker或蛋白樣品(已經過處理)加入點樣孔,穩壓電泳(表二),至藍色指示前沿至分離膠下沿位置時即可停止電泳。整個電泳過程大約需要2.5-3個小時。

              表二 多肽電泳條件

              恒電壓

              150V

              起始電流

              60-75mA/板膠

              結束電流

              15-25mA/板膠

              電泳時間

              2.5-3小時

              4.2 拆膠:

                    電泳結束后,取出凝膠,用刀片沿著短玻璃板和邊條的縫隙劃開兩側粘合膠,即可打開玻璃板。取膠時,需在凝膠和玻璃邊條之間,沿著玻璃邊條輕劃一刀,防止發生粘連使凝膠破碎。


               

              .染色:(使用FastBlue蛋白染色液 CatRTD6202

              4.1 用前必讀:

              4.1.1 使用前如發現瓶中有少許沉淀,請混勻后使用。

              4.1.2以下“使用方法”是針對0.75mm和1.0 mm厚度,10×10cm凝膠染色程序。

              4.2 使用方法:

              4.2.1. 將電泳后的PAGE膠取下放入塑料容器中,加入適量染色液(以剛剛覆蓋過膠面為適),條帶1-2分鐘即可見。

              4.2.2. 搖床上常溫搖動10-15分鐘。

              4.2.3. 觀察結果。

              4.4注意事項:

              4.4.1 使用方法中的各種參數僅針對面積8×10cm或10×10cm,厚度0.75mm和1mm的凝膠,如果使用更大面積或更厚的凝膠,請加入更多的染色液并延長染色的時間。

              4.4.2 常規染色所需的漂洗,固定,脫色步驟都無必要。

              4.4.3 本染色液可以重復利用1-2次,敏感性會有輕微下降,請延長染色時間。

              4.4.4 本染色液有輕微腐蝕性,請帶手套操作。使用后,請蓋好瓶蓋,常溫密封保存。

              . 轉膜:

              多肽轉膜選擇孔徑0.22 μm PVDF膜(用前用甲醇處理潤濕)或0.22 μm NC膜。

              5.1 半干轉:

              半干轉轉膜緩沖液:

              48 mM Tris,39 mM Glycine,0.0375 %SDS,20% Methanol,pH~9.2

              轉膜條件:恒流200 mA 15-20 min。

              5.2 濕轉:

              濕轉轉膜緩沖液:

              25 mM Tris,192 mM Glycine,0.1%SDS,20% Methanol,pH~8.3

              轉膜條件:恒流400 mA  40-60 min

              . 緩沖液配方:

              10×Tris-Tricine-SDS電泳緩沖液

              [1MTris;1MTricine ;1% SDS; pH 8.3]

              Tris堿121.14g

              Tricine 179.2g

              SDS 10 g

              用ddH2O溶解,定容至1000 ml (不要調pH)。

              貯存:4

              注:使用前稀釋10倍使用

               

              2×Tricine多肽上樣緩沖液(10 ml

              1ml 1MTris-HCl pH6.8

              2.4 ml 甘油

              0.8 g  SDS

              0.31gDTT(或者400 μl β-巰基乙醇)

              2 mg 考馬斯亮藍G-250

              用滅菌ddH2O定容至10ml

              混勻分裝-20貯存備用


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