• <output id="rvd5t"><small id="rvd5t"></small></output>

        <tr id="rvd5t"></tr>

          1. <th id="rvd5t"><sup id="rvd5t"></sup></th>
            免費咨詢電話: 400-699-0631      點擊這里給我發消息
             
             
             
            產品分類
             
            ·PCR
             
             
             





            RTD6135 RealPAGE Native BN/CN 預制膠(伯樂電泳槽用,12孔) 停產
             產品貨號: RTD6135
             產品名稱: RTD6135 RealPAGE Native BN/CN 預制膠(伯樂電泳槽用,12孔) 停產
             產品價格/規格:
             產品說明書: 暫無
             更新時間: 2022-04-22
            詳細信息   訪問次數:

            • 產品介紹
            • 發表文章
            • 相關產品
            • 質檢證書
            • RealPAGE Native BN/CN 預制膠(伯樂電泳槽用,12孔)

                     RealPAGE Natvie BN/CN Precast Gelsfor Blue/Clear Native PAGE 

              貨品規格:

              貨號

              名稱

              分離范圍

              規格

              保存

              RTD6135-0312

              3-12% RealPAGE Bis-Tris 預制膠(12 孔)

              30-10000 kD

              10

              4

              RTD6135-0416

              4-16% RealPAGE Bis-Tris 預制膠(12 孔)

              15-1000 kD

              10

              4

              產品簡介:

              Blue/Clear Native PAGE(BN/CN-PAGE)是一種從生物樣品(質膜,胞漿等)中分離分子量10 kD-10000 kD 范圍的蛋白質復合物的電泳技術。其原理是用溫和去污劑(如 DDM,digitonin)將蛋白復合體從細胞膜中以近似天然的狀態分離出來,Blue Native PAGE (BN-PAGE)是用考馬斯亮藍 G-250 代替 SDS與蛋白結合而使其帶負電荷,根據蛋白分子量不同在 PAGE膠中得到分離;Clear Native PAGE(CN-PAGE)是電泳緩沖液中不加入任何染料,電泳中始終保持蛋白的天然電荷和活性狀態,然而,其蛋白的分辨率要低于Blue Native PAGE。另外,BN-PAGE由于考馬斯亮藍G-250存在,使蛋白都覆蓋上負電荷,可以分離堿性蛋白(pI>7);而CN-PAGE只適合于酸性蛋白(pI<7)的分離。

              本產品可以用于分離分子量在 10 kD-10000 kD 的蛋白復合體,樣品可以來于胞漿、細胞總裂解液、細胞膜、線粒體膜和葉綠體膜等。電泳后可直接用于考染、銀染、Western 雜交、SDS-PAGE電泳、蛋白純化、蛋白活性檢測等分析實驗,也可直接用于電洗脫制備蛋白。

              ● 運輸和貯存:

              本產品常溫運輸;凝膠4-8℃貯存,不要冷凍;有效期6個月。

              使用說明:

              . 樣品制備:

                 該試劑盒不含樣品制備的相關試劑,樣品具體制備方法參考Blue Native PAGE. Wittig I, Braun H, Schagger H. Nature Protocols. Vol 1,No 1,418,2006.

              https://www.nature.com/articles/nprot.2006.62

              . 電泳:

              2.1 拆開預制膠包裝,將預制膠安裝在合適的電泳槽中。

              2.2 準備電泳緩沖液:

              10×BN/CN電泳緩沖液稀釋10倍即配成1×BN/CN電泳緩沖液。

              2.2.1 CN-PAGE電泳:

              內槽緩沖液(陰極緩沖液)和外槽緩沖液(陽極緩沖液)均直接使用1×BN/CN電泳緩沖液進行電泳。

              2.2.2 BN-PAGE電泳:

              外槽緩沖液使用1×BN/CN電泳緩沖液,內槽緩沖液按照下表配制:

               

              1×藍色陰極緩沖液

               

              150 ml

              10×BN/CN電泳緩沖液

              15 ml

              0.4% G-250 染料(電泳用)

              0.75 ml

              超純水

              定容至150 ml

              2.3準備樣品:

              2.3.1 CN-PAGE電泳:

              總體積

              10 μl

              蛋白樣品

              x μl

              4×BN/CN-PAGE蛋白上樣緩沖液

              2.5 μl

              超純水

              補至10 μl

               

              不要加熱

              2.3.2 BN-PAGE電泳:

              總體積

              10 μl

              10 μl

               

              含去垢劑樣品*

              不含去垢劑樣品

              蛋白樣品

              x μl

              x μl

              4×BN/CN-PAGE蛋白上樣緩沖液

              2.5 μl

              2.5 μl

              5% G-250染料(蛋白上樣)

              0.25-1 μl

              0.1 μl(終濃度0.05%)或不加

              超純水

              補至10 μl

              補至10 μl

               

              不要加熱

              不要加熱

              * 含去垢劑樣品中染料加入按照以下原則:

              樣品中G250終濃度為去垢劑終濃度的1/4。

              例如樣品中DDM終濃度為1%,則需要G-250終濃度為0.25%。10 μl蛋白樣品中需要加5% G-250染料0.5 μl。

              2.4電泳過程;

              2.4.1 CN-PAGE電泳:

              電泳內外槽均使用1×BN/CN電泳緩沖液。在電泳槽的內槽內加入1×BN/CN電泳緩沖液(讓電泳緩沖液漫過加樣孔),輕輕撥出預制膠梳子,用1ml吸頭沖洗加樣孔3次,隨后在電泳槽外槽加入適量的1×BN/CN電泳緩沖液,冰浴電泳,。

              電泳條件(一板膠)

              CN-PAGE電泳

              恒電流

              起始電壓

              結束電壓

              電泳時間

               

              10 mA

              70-90 V

              280-300 V

              1-1.5 h

              冰浴電泳

              2.4.2 BN-PAGE電泳:

              BN-PAGE電泳外槽使用1×BN/CN電泳緩沖液;內槽開始電泳使用的是1×藍色陰極緩沖液,冰浴電泳,等待電泳指示前沿到達凝膠1/3處時,將電泳緩沖液更換為1×BN/CN電泳緩沖液,繼續后續電泳,因為過多染料會影響蛋白在凝膠中的遷移以及蛋白后續的轉膜實驗。


              BN-PAGE電泳條件(一板膠)

              恒電流

              起始電壓

              電泳時間

              緩沖液

               

              10 mA

              80-110 V

              20-25 min

              1×藍色陰極緩沖液

              冰浴電泳

                             指示前沿至凝膠三分之一處,更換內槽緩沖液為1×BN/CN 電泳緩沖液

              恒電流

              繼續電泳時間

              結束電壓

              電泳總時間

              緩沖液

               

              10 mA

              60-70 min

              不要超過500 V

              1.5- 2 h

              1×BN/CN電泳緩沖液

              冰浴電泳


              . 緩沖液配方:

              3.1  10×BN/CN電泳緩沖液

              終濃度

              組份

              500 ml

              0.15 M

              Bis-Tris

              15.7

              0.5 M

              Tricine

              44.8

               

              超純水

              定容至500 ml

              徹底溶解,測定pH應為7.0左右,不要調節pH。

              3.2  0.4% G-250 染料(電泳用)

                  100ml:0.4克考馬斯亮藍G-250,溶于100 ml超純水中,漩渦攪拌2-3小時,至染料徹底溶解,4℃貯存。

              3.3  4×BN/CN 蛋白上樣緩沖液

              組成:200mM Bis-Tris,40%甘油,200 mM NaCl,0.04%麗春紅S  pH7.0

              順序

              終濃度

              原料

              50 ml

              1

              200 mM Bis-Tris

              粉末

              0.418

              2

              超純水

               

              20 ml

               

               

               

              pH9.4

              3

              HCl

               

              200 μl

               

               

               

              調節pH7.1 左右

              4

              40% 甘油

              甘油

              25

              5

              200 mM NaCl

              粉末

              0.58

              6

              0.04% 麗春紅S

              粉末

              20 毫克

              7

              超純水

               

              定容至 50 ml

               

               

               

              最終pH7.0 25

              3.4  5% G-250 染料(上樣用)

                  組成: 5% G-250,500 mM 6-氨基己酸

                  50 ml:稱取2.5克考馬斯亮藍G-250,3.28克6-氨基己酸溶于50 ml超純水中,漩渦攪拌2-3小時,至染料徹底溶解,4溫度貯存。

              實驗示例:



            TOP】【打印本頁】【關閉窗口



            中科瑞泰(北京)生物科技有限公司 版權所有 京ICP備12052607 網站管理   快遞查詢   IF查詢
            電話:010-58437227 免費電話:400-699-0631 傳真:010-57909566
            點擊這里給我發消息   內勤訂貨QQ:2446698252   技術支持QQ:460449375 電子郵箱:real-times@vip.163.com
            注意:公司所有產品僅供科研使用
            _×
            在線咨詢
            99久热精品免费观看_潮喷失禁大喷水av无码_中国女人free性hd_国产人A片视频在线播放