RealPAGE Native BN/CN 預制膠(U型板，通用型，12孔)

       RealPAGE Native BN/CN Precast Gels(U Type Plate,Universal,12 Wells)

● 貨品規格：

● 產品簡介：

Blue/Clear Native PAGE（BN/CN-PAGE）是一種從生物樣品（質膜，胞漿等）中分離分子量10 kD-10000 kD 范圍的蛋白質復合物的電泳技術。其原理是用溫和去污劑(如 DDM，digitonin)將蛋白復合體從細胞膜中以近似天然的狀態分離出來，Blue Native PAGE （BN-PAGE）是用考馬斯亮藍 G-250 代替 SDS與蛋白結合而使其帶負電荷，根據蛋白分子量不同在 PAGE膠中得到分離；Clear Native PAGE（CN-PAGE）是電泳緩沖液中不加入任何染料，電泳中始終保持蛋白的天然電荷和活性狀態，然而，其蛋白的分辨率要低于Blue Native PAGE。另外，BN-PAGE由于考馬斯亮藍G-250存在，使蛋白都覆蓋上負電荷，可以分離堿性蛋白（pI＞7）；而CN-PAGE只適合于酸性蛋白（pI＜7）的分離。

本產品可以用于分離分子量在 10 kD-10000 kD 的蛋白復合體，樣品可以來于胞漿、細胞總裂解液、細胞膜、線粒體膜和葉綠體膜等。電泳后可直接用于考染、銀染、Western 雜交、SDS-PAGE電泳、蛋白純化、蛋白活性檢測等分析實驗，也可直接用于電洗脫制備蛋白。

● 運輸和貯存：

本產品常溫運輸；凝膠4-8℃貯存，不要冷凍；有效期6個月。

● 使用說明：

一. 樣品制備：

   樣品具體制備方法參考Blue Native PAGE. Wittig I, Braun H, Schagger H. Nature Protocols. Vol 1,No 1,418,2006. 

二. 電泳：

2.1 拆開預制膠包裝，將預制膠安裝在合適的電泳槽中。

注：伯樂Mini III或Mini-PROTEAN Tetra Cell，天能VE-180，六一24K系列電泳槽請確保密封條的安裝方向（下圖）。

六一其他系列，君意東方JY-SCZ2/4，百晶BG-verMINI等電泳槽可以直接使用預制膠。

不兼容Thermol系列電泳槽。

2.2 準備電泳緩沖液：

10×BN/CN電泳緩沖液稀釋10倍即配成1×BN/CN電泳緩沖液。

2.2.1 CN-PAGE電泳：

內槽緩沖液（陰極緩沖液）和外槽緩沖液（陽極緩沖液）均直接使用1×BN/CN電泳緩沖液進行電泳。

2.2.2 BN-PAGE電泳：

外槽緩沖液使用1×BN/CN電泳緩沖液，內槽緩沖液按照下表配制：

2.3準備樣品：

2.3.1 CN-PAGE電泳：

2.3.2 BN-PAGE電泳：

注：以下以植物類囊體膜蛋白電泳為例。

* 含去垢劑樣品中染料加入按照以下原則：

樣品中G250終濃度為去垢劑終濃度的1/4。

例如樣品中DDM終濃度為1%，則需要G-250終濃度為0.25%。10 μl蛋白樣品中需要加5% G-250染料0.5 μl。

2.4電泳過程；

2.4.1 CN-PAGE電泳：

電泳內外槽均使用1×BN/CN PAGE電泳緩沖液。在電泳槽的內槽內加入1×BN/CN PAGE電泳緩沖液(讓電泳緩沖液漫過加樣孔)，輕輕撥出預制膠梳子，用1ml吸頭沖洗加樣孔3次，隨后在電泳槽外槽加入適量的1×BN/CN PAGE電泳緩沖液。

2.4.2 BN-PAGE電泳：

BN-PAGE電泳外槽使用1×BN/CN電泳緩沖液；內槽開始電泳使用的是1×藍色陰極緩沖液，冰浴電泳，等待電泳指示前沿到達凝膠1/3處時，將電泳緩沖液更換為1×BN/CN電泳緩沖液，繼續后續電泳，因為過多染料會影響蛋白在凝膠中的遷移以及蛋白后續的轉膜實驗。

BN-PAGE電泳條件（一板膠）

三. 實驗示例：

BN-PAGE 3-12% Precast Gel

恒壓 120V 1.5 小時 冰浴電泳

BN-PAGE 4-16% Precast Gel

恒壓 120V 2 h 1×BN/CN電泳緩沖液 冰浴電泳