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            PP5040 植物脯氨酸檢測試劑盒
             產品貨號: PP5040
             產品名稱: PP5040 植物脯氨酸檢測試劑盒
             產品價格/規格: 50次 400元
             產品說明書: 點擊查看
             更新時間: 2022-03-22
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            • 植物脯氨酸檢測試劑盒(茚三酮比色法)

              Plant Proline Assay Kit with Ninhydrin

              產品組成:

              組分貨號

              名稱

              規格

              貯存

              PP5040-01

              試劑1-Pro裂解液

              125 ml

              RT

              PP5040-02

              試劑2-Pro標準液

              1 ml

              4℃

              PP5040-03

              試劑3-Pro顯色液

              50 ml

              4 避光

              ●  產品簡介:

              脯氨酸(Proline,Pro)是一種環狀的α-亞氨基酸,呈中性,等電點為6.30,易溶于水。在正常環境情況下脯氨酸含量較低,但在逆境下(旱、熱、冷、凍、鹽堿等),脯氨酸常有明顯積累,即積累指數與植物的抗逆性有關。植物脯氨酸檢測試劑盒(茚三酮比色法)檢測原理是脯氨酸與茚三酮共熱發生反應,能產生穩定的紅色產物,以分光光度計測定處吸光度,在一定范圍內顏色深淺(即吸光度)與脯氨酸濃度成正比。

              該試劑盒不使用甲苯等有害溶劑,經濟環保。

              該試劑盒主要用于測定植物組織中的游離脯氨酸含量,不適用于動物及醫療樣品中脯氨酸的測定。

              按照一次使用1 ml Pro顯色液計算,試劑盒可以使用50次。

              自備材料:

              植物根莖、葉子等;剪刀;螺蓋離心管或鎖蓋離心管或96孔板;1ml玻璃比色皿;分光光度計或酶標儀;水浴鍋或干浴器;離心機

              操作步驟:

              1、 樣本處理:

              取新鮮植物組織,清洗干凈,擦干,剪碎,迅速稱取, 按照20mg重量加入1ml Pro裂解液(注意是否已經加入無水乙醇)的比例加入Pro裂解液(建議使用1.5ml螺口離心管或鎖蓋離心管),沸水浴或干浴處理20分鐘 (期間間歇混勻),10000 rpm離心 2分鐘,上清即為脯氨酸提取液,4℃保存備用。待測提取液如不能及時測定,應置于-20℃保存,1-2天內穩定。

              2、 配制系列脯氨酸標準溶液:

              取1ml 試劑1-Pro裂解液全部加入到試劑2-Pro標準液的小管中,混勻后徹底溶解,即配成的Pro標準液(100mg/ml)。

              取1 μl 100mg/ml 標準液加入到1ml Pro裂解液中,即配成100μg/ml Pro標準液待用。參照下表配制1-6號不同濃度的Pro標準溶液。

               

              編號

              1

              2

              3

              4

              5

              6

              7

              8

              100μg/ml Pro標準液加入量(ml

              0.01

              0.02

              0.04

              0.06

              0.08

              0.10

              0.15

              0.2

              Pro裂解液(ml

              0.49

              0.48

              0.46

              0.44

              0.42

              0.4

              0.35

              0.3

              脯氨酸含量(μg

              1

              2

              4

              6

              8

              10

              15

              20

              4、 樣品測定:

              = 1 \* GB3 分光光度計測定:參考下表設置反應混合液,依次加入試劑:

              編號

              0

              1-8

              9-X

               

              空白管

              標準管

              測定管

              試劑1-Pro裂解液

              0.5 ml

              -

              -

              步驟1中的脯氨酸提取液

              -

              -

              0.5 ml

              Pro標準液(步驟31-8管)

              -

              0.5 ml

              -

              試劑3-Pro顯色液

              1 ml

              1 ml

              1 ml

              ③ 水浴煮沸或干浴20分鐘,間歇混勻。加熱時務必注意避免液體暴沸濺出,可使用鎖蓋離心管或螺旋蓋離心管。

              ④ 冰浴或流水冷卻至室溫,10000 rpm離心 2分鐘,如發現沒有不溶物,也可以不離心。 

              ⑤ 取上清,用空白管作為對照,取1ml反應混合液用分光光度計測定520nm吸光度值。

              = 6 \* GB3 酶標儀測定:參考下表設置反應混合液,依次加入試劑:

               

              空白管

              標準管

              測定管

              試劑1-Pro裂解液

              50 μl

              -

              -

              步驟1中的脯氨酸提取液

              -

              -

              50 μl

              Pro標準液(步驟31-8管)

              -

              50 μl

              -

              試劑3-Pro顯色液

              100 μl

              100 μl

              100 μl

               5、 計算:

              以系列脯氨酸標準(1-8號管)含量(μg)為橫坐標,以對應的吸光度為縱坐標,制作標準曲線,根據測定管的吸光度進而計算其脯氨酸含量。

              如使用分光光度計測定,根據如下公式計算具體樣品中脯氨酸的含量:

              植物組織樣品脯氨酸含量(μg/g)=1.5(C×VT)/(W×VS) =3C/W


              VT=步驟1中脯氨酸提取液總體積(ml),此處為1ml

              W=步驟1中使用的樣品鮮重(g)

              VS=步驟4中測定時加入的脯氨酸提取液體積(ml),本實驗為0.5ml

              1.5系數為步驟4中反應混合液體積為1.5ml,取1ml測定吸光值


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