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            RTG2405 2×CTAB提取緩沖液
             產品貨號: RTG2405
             產品名稱: RTG2405 2×CTAB提取緩沖液
             產品價格/規格: 200ml 150元/500 ml 300元
             產品說明書: 點擊查看
             更新時間: 2022-06-07
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            • 2×CTAB提取緩沖液

              ● 產品編號及規格:                                             

              貨號

              名稱

              規格

              貯存

              RTG2405-200ml

              2×CTAB提取緩沖液

              200 ml

              RT

              RTG2405-500ml

              2×CTAB提取緩沖液

              500 ml

              RT

              BME

              還原劑

              1 ml

              RT

               

              說明書

              一份

               

              ● 產品介紹:

                  CTAB (hexadecyltrimethylammonium bromide,十六烷基三甲基溴化銨),是一種陽離子去污劑,具有從低離子強度溶液中沉淀核酸與酸性多聚糖的特性。在高離子強度的溶液中(>0.7 M NaCl) CTAB與蛋白質和多聚糖形成復合物而不沉淀核酸。通過有機溶劑抽提,去除蛋白、多糖、酚類等雜質后加入醇(乙醇或異丙醇)沉淀即可使核酸分離出來。

                  2×CTAB提取緩沖液成分:2%(w/v)CTAB,100mM Tris (pH 8.0),20mM EDTA,1.4 MNaCl,,還原劑(隨用隨加) 。

              ● 儲存及運輸:

                 常溫貯存2年;常溫運輸。

              ● 實驗操作步驟:

              DNA提。

                 1. 2×即用型CTAB提取液配制:

              按照終濃度0.2% (v/v)加入還原劑,如1 ml 2×CTAB提取緩沖液中加入2 μl還原劑。2×即用型CTAB提取液建議現用現配。

              2. 材料研磨:

              取0.2-0.5新鮮植物材料,于液氮中研磨成粉末。

              3. 樣品裂解:

              按照每100 mg研磨粉末使用0.5 ml提取緩沖液的比例將粉末轉入1.5 ml離心管中,立即加入65℃預熱的2×即用型CTAB提取緩沖液,65水浴30分鐘,間歇混勻。

              注:提取緩沖液使用量不要超過0.7 ml,否則后續純化不能在一個離心管內完成;CTAB溶液在低于15℃時會形成沉淀析出,因此,在將其加入冰冷的植物材料之前必須預熱,且離心時溫度不要低于15℃。

              4. 離心去雜質:

              14000 g 常溫離心5分鐘,轉移上清至新的1.5 ml離心管中。

              5. 去除RNA:

              上清中加入1/100上清體積的RNaseA溶液(10 mg/ml)(貨號:RN001),如500 μl上清中加如5 μl RNaseA溶液,37℃處理20分鐘。

              6. 第一次抽提純化:

              6.1 步驟5溶液中加入等體積的DNA抽提溶液I(25:24:1)(貨號:PC1015),輕緩顛倒離心管混勻8-10次,常溫14000 g 離心10分鐘,保留上清。

              6.2. 重復抽提一次。

              7. 第二次純化:

              上清中加入等體積核酸抽提溶液(24:1)(貨號:PC1017),顛倒離心管混勻8-10次,常溫14000 g離心10分鐘,保留上層水相。

              8. 沉淀DNA:

              8.1 將上層水相轉入新的1.5 ml離心管中,加入0.6倍體積的冰冷異丙醇,輕柔混勻,-20℃靜

              置30分鐘;

              8.2 14000 g4℃離心10分鐘。

              9. 漂洗DNA:

              9.1 去上清液, 加入1ml 70%乙醇漂洗沉淀,414000 g 3分鐘,吸棄乙醇。

              9.2 4 14000 g 1分鐘,用移液器吸盡殘余乙醇,超凈臺吹干沉淀。

              注:沉淀不能徹底干燥,否則不好溶解。

              10. 貯存DNA:

              加入50-100 μl的超純水或TE緩沖液(貨號:TE1050)溶解DNA,-20保存備用。

              RNA提。

              注:以下程序請注意所有試劑都要保證RNase-free。

              1. 2×即用型CTAB提取液(RNase-free)(貨號:RTG2405F)配制(現用現配):

                    2×CTAB提取緩沖液中按照1/1000體積加入DEPC,如100 ml中加入100 μl DEPC,混勻后過夜處理,高溫高壓,即為2×即用型CTAB提取緩沖液(RNase-free)。按照終濃度1 % (v/v)加入還原劑,如1 ml 2×CTAB提取緩沖液(RNase-free)中加入10 μl還原劑。2×即用型CTAB提取液建議現用現配。

              2. 材料研磨:

              取0.2-0.5新鮮植物材料,于液氮中研磨成粉末。

              3. 樣品裂解:

              按照每100 mg研磨粉末使用0.5 ml提取緩沖液的比例將粉末轉入1.5 ml離心管中,立即加入65℃預熱的2×即用型CTAB提取緩沖液,65水浴30分鐘,間歇混勻。

              注:提取緩沖液使用量不要超過0.7 ml,否則后續純化不能在一個離心管內完成;CTAB溶液在低于15℃時會形成沉淀析出,因此,在將其加入冰冷的植物材料之前必須預熱,且離心時溫度不要低于15℃。

              4. 離心去雜質:

              14000 g 常溫離心5分鐘,轉移上清至新的1.5 ml離心管中。

              5. 第一次純化:

              上清中加入等體積的RNA抽提溶液I(25:24:1)(貨號:PC1018),輕緩顛倒離心管混勻8-10次,常溫14000 g 離心10分鐘。

              6. 第二次純化:

              將上清液轉入另一1.5 ml離心管中,加入等體積核酸抽提溶液(24:1)(貨號:PC1017),顛倒離心管混勻8-10次,常溫14000 g離心10分鐘。

              7. 沉淀RNA:

              將上層水相轉入新的1.5 ml離心管中,加入1/2體積7.5 M LiCl(RNase-free)(貨號:LC1030),輕柔混勻,-20℃ 靜置30分鐘;14000 g4℃離心10分鐘。

              9. 漂洗RNA:

              9.1 去上清液, 沉淀中加入1ml 70%乙醇(RNase-free),吹打漂洗沉淀,14000 g4℃3分鐘,吸棄乙醇。

              9.2 14000 g4℃1分鐘,用移液器吸盡殘余乙醇,超凈臺吹干沉淀。

              注:RNA沉淀不能過分干燥,否則不好溶解。

              10. 貯存RNA:

              加入50-100 μl的RNase-free水(貨號:RF001)溶解RNA,-80保存備用。



            • 使用該產品發表部分文章列表:

              1. [IF=4.35] Combined Effect of High-Pressure Processing with Spice Extracts on Quality of Low-Salt Sausage during Refrigerated Storage.

              Author:Qing Xiao, Mei Xu, Baocai Xu, Conggui Chen, Jieying Deng and Peijun Li

              Journal: Foods. 2021, 10, 2610.

              InstitutionHefei University of Technology

              Paper linkhttps://www.mdpi.com/2304-8158/10/11/2610

              2. [IF=3.579] Effect of Lactobacillus plantarum andStaphylococcus xylosus on flavour development and bacterial communities in Chinese dry fermented sausages.

              Author: YaqingXiao,PeijunLi

              Journal: Food Research International. 2020.

              InstitutionHefei University of Technology

              Paper linkhttps://doi.org/10.1016/j.foodres.2020.109247



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