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            RTP3104 PAGE凝膠DNA回收試劑盒(吸附柱法)
             產品貨號: RTP3104
             產品名稱: RTP3104 PAGE凝膠DNA回收試劑盒(吸附柱法)
             產品價格/規格: 50次 500元
             產品說明書: 點擊查看
             更新時間: 2022-03-22
            詳細信息   訪問次數:

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            • PAGE凝膠DNA回收試劑盒(吸附柱法)(目錄號:RTP3104

              試劑盒內容及保存:

              試劑盒組成

              RTP3104 50次)

              貯存

              提取液A

              10 ml

              RT

              結合液B

              50 ml

              RT

              助沉劑C

              10 ml

              RT

              漂洗液PW(濃縮液)

              25 ml

              RT

              洗脫緩沖液EB

              15 ml

              RT

              3 M NaAc pH5.2

              500 μl

              RT

              吸附柱CA1

              50

              RT

              套管

              50

              RT

              塑料研磨杵

              5/

              RT

              說明書

              1

               

              運輸、儲存條件和效期:

              常溫運輸,常溫保存,有效期為一年。

              產品簡介及使用說明:

              本試劑盒適用于從PAGE 膠中回收50-500 bp 的雙鏈DNA 片段,回收效率可達30-80%。該試劑盒采用特殊的吸附膜,能夠有選擇性地吸附核酸分子,去除其他雜質,得到高質量的DNA回收產物。所得到的DNA可直接用于酶切、連接、測序等后續的分子生物學試驗。

              注:該試劑盒也能回收單鏈DNA片段,但回收效率偏低。

              本試劑盒具有以下特點:

              1. 適用范圍廣,回收效率高,對于50-500 bp之間的DNA片段,回收效率在30-80%。

              2. 操作簡單快速

              3. 無需酚氯仿抽提,無需乙醇沉淀。

              按照每次使用200 μl提取液A計算,試劑盒可以使用50次。

              使用方法:

              1.電泳:

              PAGE電泳后染色觀察DNA 并確定需要回收的DNA 條帶的位置,確保目的DNA片段與其他片段分開。

              2.切膠:

              用干凈的刀片小心切取含DNA片段的PAGE凝膠到一個干凈的1.5 ml離心管中。

              注:盡可能多地把多余的膠切除,否則多余的凝膠會降低DNA的回收效率。

              3.DNA提。

              3.1 根據膠塊重量,每100 mg膠塊加200 μl比例加入提取液A(如膠塊不足100 mg,用滅菌水補足100 mg),用塑料研磨杵充分將凝膠塊搗碎。

              注:膠的重量控制在0.3克以下為宜,否則會導致DNA片段擴散提取不完全。

              3.2  55℃水浴30分鐘,間隙混勻,促進凝膠中的DNA擴散到溶液中。

              3.3  13000 rpm離心5分鐘,小心將上清液(含DNA片段)轉移到一個新的1.5 ml離心管中。

              4. 上清液中依次加入3倍上清體積結合液B和1倍上清體積的助沉劑C,混勻。

              注:如果此時溶液變為粉紅色,請加入少量3MNaAc pH5.2(一般說來,10 μl足矣),使溶膠液變為黃色再上柱離心。

              5. 將上一步所得溶液加入到吸附柱CA1中(吸附柱放入收集管中),常溫放置2分鐘,13,000 rpm離心60秒,倒掉收集管中的廢液,將吸附柱重新放入收集管中。

              注:吸附柱CA1的有效容積為750 μl,如溶液體積大于750 μl,分次上柱,保證全部溶液都加到吸附柱中。

              6. 向吸附柱CA1中加入700 μl漂洗液PW(使用前請先檢查是否已加入無水乙醇),13,000 rpm離心60秒,倒掉廢液,將吸附柱重新放入收集管中。

              7. 向吸附柱CA1中加入500 μl漂洗液PW,13,000 rpm離心30-60秒,倒掉廢液。

              8. 將離心吸附柱CA1放回收集管中,13,000 rpm離心2分鐘,盡量除去漂洗液。

              注:此步必不可少!如果漂洗液有殘留會影響回收效率和DNA質量,進而影響下游實驗;離心后將吸附柱蓋子打開,常溫放置2分鐘,這樣將有助于徹底揮發殘余乙醇。

              9. 將吸附柱放到一個干凈1.5 ml離心管中,向吸附膜中間位置懸空滴加適量65℃預熱的洗脫緩沖液EB(一般不要少于30 μl),常溫放置2分鐘。13,000 rpm離心1分鐘收集DNA溶液。

              注:CA1柱的洗脫體積不應少于30 μl,體積過小將會降低回收效率;洗脫液的pH值對于洗脫效率有很大影響。由于PAGE膠中片段較小,不建議用水進行洗脫。

              10. DNA產物-20℃保存。

              實驗示例:

              片段范圍

              回收效率

              25 bp

              10%

              25-50 bp

              30%

              50-100 bp

              ~70%

              大于100 bp

              ~80%

               


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