限制級凝血酶

Thrombin, Restriction Grade

● 產品包裝：

● 產品簡介：

凝血酶（Thrombin）來源于牛血漿，分子量37KD，是由兩條肽鏈（31KD和6KD）通過二硫鍵組成的。凝血酶是一種廣泛用于切割標簽的蛋白酶，通常能夠有效切割質量比為1:2000的蛋白。凝血酶最佳切割位點是X4-X3-P-R[K]-X1'-X2'（X4 和 X3 是疏水氨基酸而X1'和 X2'是非酸性氨基酸），一些經常使用的識別位點是L-V-P-R-G-S,L-V-P-R-G-F,和M-Y-P-R-G-N。在X4-X3-P-R-G-X2'之間切割比在X4-X3-P-K-L-X2'更有效。在凝血酶切割位點和N末端標簽之間插入五個甘氨酸殘基可改善酶切，通過這一"甘氨酸連接肽"只需較少酶量就可達到完全切割,而且也可以避免可能發生的錯誤切割。凝血酶可從切割產物中用p-氨基瓊脂糖親和純化,或者苯甲脒瓊脂糖移去。

單位定義：1 U在標準切割緩沖液里20℃ 16小時能切割1mg的目的蛋白。

● 保存條件：

-20℃保存，一年有效。

● 使用方法：

1 用0.1ml 1×凝血酶稀釋/貯存緩沖液（1×Thrombin Dilution/Storage buffer）（50 mMsodium citrate,200 mMNaCl, 0.1% PEG-8000, 50% glycerol, pH 6.5）徹底溶解1000 U凝血酶粉末，得到凝血酶母液，濃度為10U/μl。

2 用1×凝血酶稀釋/貯存緩沖液將凝血酶母液按照1:25,1:50,1:100,1:200進行梯度稀釋，稀釋液含有大約每μl 0.4U，0.2U，0.1U，0.05U凝血酶。

3 按照下表配制反應液；

4 常溫（20-25℃）孵育，2小時，4小時，6小時，8小時分別取樣10μl與5×SDS-PAGE上樣緩沖液混合后電泳檢測，確定酶切程度。