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            AP5015 10×酸性蛋白Native PAGE轉膜緩沖液
             產品貨號: AP5015
             產品名稱: AP5015 10×酸性蛋白Native PAGE轉膜緩沖液
             產品價格/規格: 1升 150元
             產品說明書: 暫無
             更新時間: 2022-06-07
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            • 10×酸性蛋白Native PAGE轉膜緩沖液

              產品編號

              產品名稱

              規格

              AP5015

              10×酸性蛋白Native PAGE轉膜緩沖液(粉末)

              1

              簡介:

              10×酸性蛋白Native PAGE轉膜緩沖液適用于酸性蛋白電泳后凝膠上非變性酸性蛋白的轉膜。本轉膜液配制便捷,稀釋后無需調節pH值,pH約為9.2。緩沖液主要成分為Tris,甘氨酸和微量SDS。該緩沖液最終可配成10升即用型1×緩沖液(要補加甲醇)。

              保存條件:

              粉末裝常溫保存,兩年有效。

              配制方法:

              10×轉膜緩沖液粉末全部溶解于1升超純水中,徹底溶解,即配成10×轉膜緩沖液。根據下表配制成1×即用型轉膜緩沖液

               

              1×即用型轉膜緩沖液

               

              500 ml

              1 L

              10×轉膜緩沖液

              50 ml

              100 ml

              超純水

              400 ml

              800 ml

              無水甲醇

              50 ml

              100 ml

               

              不用調節pH

              使用方法:

              1. 酸性蛋白非變性電泳:

              各種蛋白質分子由于所含的堿性氨基酸和酸性氨基酸的數目不同,因而有各自的等電點。凡堿性氨基酸含量較多的蛋白質稱為堿性蛋白,等電點偏堿性,pI>7,如組蛋白、精蛋白等。反之,凡酸性氨基酸含量較多的蛋白質,等電點就偏酸性,pI<7,自然界中大多數蛋白都是酸性蛋白。分離堿性蛋白時候,要利用低 pH 凝膠系統,分離酸性蛋白時候,要利用高 pH 凝膠系統。酸性蛋白通常在非變性凝膠電泳中采用的 pH 是 8.8的緩沖系統,蛋白會帶負電荷,蛋白會相陽極移動;而堿性蛋白通常電泳是在微酸性環境下進行,蛋白帶正電荷,這時候需要將陰極和陽極倒置才可以電泳。酸性蛋白電泳可參考使用非變性PAGE凝膠制備及電泳試劑盒(貨號:RTD6130)。

              2. 轉膜:

                轉膜方法:酸性蛋白在非變性狀態的轉膜建議用濕轉法。

                三明治結構:由于酸性蛋白pI<7 在堿性轉膜緩沖液中帶負電荷,轉膜三明治結構與傳統轉膜相同,即根據“黑膠白膜”制作三明治,即膜置于轉膜夾芯正極一側,凝膠置于轉膜夾芯負極一側,這樣凝膠上帶負電荷的酸性蛋白才能轉移到膜上。

              酸性蛋白轉膜三明治制作:

              負極(電轉夾黑色面)-海綿墊-35層濾紙-凝膠--35層濾紙-海綿墊-正極(電轉夾白色面)

                膜的選擇:膜可以用PVDF膜或NC膜,根據蛋白大小選擇膜的孔徑。一般說來,大于20kD蛋白選擇0.45μm孔徑,低于20kD選擇0.22μm孔徑。PVDF膜使用前要用無水甲醇潤濕活化,NC膜只需用轉膜緩沖液潤濕就可以。

              轉膜條件:

              由于在非變性條件下,不同酸性蛋白的空間結構,聚合狀態,電荷數量都有不同,以下轉膜條件僅供參考,客戶針對自己的目的蛋白,最好經過1-2次預實驗后,確定最佳的轉膜條件。

              蛋白大小

              穩流

              建議時間

              降溫措施

              低于70kD

              180 mA

              2 小時

              需要

              高于70kD

              300 mA

              1.5 小時

              需要




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