TMB顯色液(沉淀型，組化或膜HRP顯色用)

TMB Color Development Solution for IHC or Blotting

●       產品簡介：

TMB，即 3, 3′,5 ,5′-Tetramethylbenzidine，是辣根過氧化物酶（HRP）的常用底物。在辣根過氧化物酶或其他適當過氧化物酶的催化下，TMB 會產生藍色產物。TMB 顯色液（沉淀型，組化或膜HRP顯色用，TMB Color Development Solution for IHC or Blotting）采用最新的單一溶液的 TMB 顯色技術，用于 Western 或免疫組化等 HRP的顯色檢測，簡化了操作步驟，并且使檢測結果更加穩定可靠。本顯色液具有高靈敏性，與 HRP反應后產生藍紫色沉淀，沉淀吸附于印跡膜上，不會脫落，方便顯色結果的保存和觀察。

 本試劑盒主要適用于免疫組化或原位雜交時HRP的顯色檢測，以及Western、Southern、Northern等HRP的膜顯色檢測；本顯色液也可以用于原位檢測細胞或組織內源性的過氧化物酶。由于產生的是沉淀型藍色產物，不適用于ELISA檢測。

 用于免疫組化檢測時，如果每個樣品的顯色液用量為0.1ml，則可以檢測1000個樣品；對于膜的顯色檢測，如果每次使用2.5 ml顯色液，則可以檢測40次。

● 保存條件：

2-8℃避光保存；一年有效。

● 使用說明：

 如果發現TMB顯色液出現混濁或顏色變成藍色，應該停止使用。

一. 免疫組化檢測：

1. 參考免疫組化的實驗步驟，在與辣根過氧化物酶標記的抗體孵育后，用適當洗滌液洗滌3-5次，每次3-5分鐘。

2. 洗滌完畢后，去除洗滌液，滴加約100微升TMB顯色液。

3. 室溫避光孵育3-30分鐘或更長時間(可在濕盒中顯色過夜)，直至顯色至預期深淺。

4. 去除染色液，加入重蒸水孵育10分鐘以終止反應。

5. 拍照記錄或適當封片后拍照記錄。如果有必要，可以使用中性紅染色液進行復染后再進行拍照記錄或適當封片后拍照記錄。

二. 膜的HRP顯色檢測：

1. 參考相應的實驗步驟，在與辣根過氧化物酶標記的抗體孵育后，用適當洗滌液洗滌3-5次，每次5分鐘左右。

2. 洗滌完畢后，去除洗滌液，

3. 滴加約適量TMB顯色液充分覆蓋膜。

4. 室溫避光孵育3-30分鐘或更長時間(可長達數小時)，直至顯色至預期深淺。

5. 直接拍照記錄。

● 常見問題：

一. 背景顯色太深。

1. 如果背景顯色太深，一方面需考慮使用適當的封閉液進行封閉，例如選購適當的封閉液或使用和一抗相同來源的血清(10%)進行封閉。另一方面，請選購經過適當吸附的二抗，以減小二抗的非特異性吸附。

2. 可以考慮縮短顯色時間，或降低二抗濃度。另外，選擇適當強度的洗滌液，或延長洗滌時間也會有所幫助。

二. 沒有顯色或顯色太弱。

 1. 適當提高一抗或二抗的濃度。在離心管內用稀釋的二抗與染色液反應，檢測二抗是否可以被正常顯色。 

2. 可以考慮使用更加靈敏的放大檢測體系，例如使用生物素檢測體系。

3. 可以適當延長顯色時間。

4. 如果上述改進不能獲得預期效果，對于免疫組化或Western，可以考慮更換效果更好的一抗；對于Southern、Northern或原位雜交，則可以考慮更換探針。