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            ·PCR
             
             
             





            RTR2103 RTScript All-in-One 1st-Strand cDNA Synthesis Kit
             產品貨號: RTR2103
             產品名稱: RTR2103 RTScript All-in-One 1st-Strand cDNA Synthesis Kit
             產品價格/規格: 50次 600元
             產品說明書: 點擊查看
             更新時間: 2022-04-22
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            • RTScript All-in-One 1st-Strand cDNA Synthesis Kit

              ●  產品貨號及規格:

              貨號

              包裝

              貯存

              RTR2103-01

              50×20μl

              -20

              ●  產品組成:

              組成

              包裝

              5×RTScript 1st Strand cDNA Synthesis MasterMix

              200 μl

              gDNA Remover

              50 μl

              10×gDNA Remover Buffer

              100 μl

              RNase-free H2O

              1 ml

              ●  產品簡介:

              本試劑盒含有反轉錄需要的全部試劑(RTScript MMLv Reverse Transcriptase,RNase Inhibitor,dNTP、反應 Buffer,Oligo (dT)18,Random primer),濃度為5×。進行RNA反轉錄反應時,只需加入模板和RNase Free H2O 即可高效合成第一鏈cDNA,大大簡化了操作過程、提高了效率、減少了操作過程中的人為誤差。本制品含有去基因組成分gDNA Remover,以RNA為模板進行cDNA第一鏈合成時,可以同步去除基因組DNA污染,與傳統DNaseI消化對比,gDNA Remover消化后無需加入EDTA進行失活;反應結束后,65℃加熱2分鐘,就可以不可逆失活。具有快速簡便、重復性高、特異性好、靈敏度高和穩定性好的特點。該試劑盒采用的反轉錄酶去除了 RNase H活性,從而避免反轉錄過程中降解RNA。 同時經過突變文庫篩選,使得其熱穩定性更強,可耐受50℃高溫反應。相比于低溫條件下反轉錄反應,采用高溫反轉錄可顯著打開 RNA二級結構,從而提高復雜 RNA 模板的擴增性能、提高反轉錄 cDNA的長度(可以獲得12 kb cDNA)和產量,從而提高后續檢測的靈敏度。合成的第一鏈 cDNA可廣泛用于 2nd Strand 的合成、 雜交、 PCR擴增、Real-Time PCR 反應等。

              ●  貯存和運輸:

              開封后-20℃貯存兩年;濕冰運輸。

              ●  使用方法:

              . 去除基因組DNA污染:

              1.1冰上配制如下體系:

              組份

              加入體積

              Total RNA/mRNA

              100ng-2μg(8 μl)

              gDNA Remover

              1μl

              10×gDNA Remover Buffer

              1 μl

              RNase-free H2O

              up to 10 μl

              1.2輕柔混勻,快甩離心,37處理 2 min,去除基因組污染,冰上放置。

              注:若RNA中基因組DNA污染嚴重,可以延長37℃處理5 min。

              1.3 65℃處理2 min,失活gDNA Remover,冰上放置。

              . 第一鏈cDNA合成(反轉錄反應)

              2.1冰上配制如下體系:

              組份

              加入體積

              步驟1中的反應液

              10 μl

              5×RTScript 1st Strand cDNA Synthesis MasterMix

              4 μl

              RNase-free H2O

              6 μl

              2.2 反轉錄:輕柔混勻,快甩離心; 50℃孵育15 min,

              2.3 終止反應:85℃孵育 5 min,終止反應。

              反應產物可直接用于 PCR,如果不立即使用,-20℃ 保存,長時間保存建議-80℃ 放置。

              ●  注意事項:

                  5×RTScript 1st Strand cDNA Synthesis MasterMix中已經包含Oligo (dT)18和Random primer,不僅適用于包含poly(A)結構的真核生物mRNA,也適用于不含poly(A)結構的原核生物RNA,真核生物rRNA和tRNA等模板,但不適用于miRNA等小RNA模板。



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