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            ·PCR
             
             





            RTR2308 RealPure植物種子RNA提取試劑盒
             產品貨號: RTR2308
             產品名稱: RTR2308 RealPure植物種子RNA提取試劑盒
             產品價格/規格: 50次 1200元
             產品說明書: 點擊查看
             更新時間: 2022-06-07
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            • RealPure®Plant Seed RNA Extraction Kit

              RealPure®植物種子RNA提取試劑盒

              試劑盒內容及保存:

              試劑盒組成

              RTR2308-S

              5次)

              RTR2308-01

              50次)

              貯存方式

              裂解液RSL

              5 ml

              30 ml

              常溫

              緩沖液PRS

              0.5 ml

              3 ml

              常溫

              裂解液RL plus

              3 ml

              30 ml

              常溫

              去蛋白液RD

              3 ml

              30 ml

              常溫

              漂洗液RW(濃縮液)

              1.5 ml

              首次使用按照標簽加入無水乙醇

              25 ml

              首次使用按照標簽加入無水乙醇

              常溫

              RNase-free

              1 ml

              5 ml

              4

              DNA清除柱CSRNase-free

              5

              50

              常溫

              RNA吸附柱CRRNase-free

              5

              50

              常溫

              收集管

              10

              100

              常溫

              2 ml離心管(RNase-free

              5

              50

              常溫

              1.5 ml離心管(RNase-free

              15

              150

              常溫

              說明書

              1

              1

               

              儲存條件和效期:

              RNase-free水4℃保存;其他試劑在常溫(25℃左右)干燥條件下,可保存1年。試劑盒常溫運輸。

              產品簡介:

              本試劑盒可從植物種子中快速提取總RNA,通過獨特的裂解系統,快速去除植物組織中的淀粉、多糖等成分,釋放 RNA。試劑盒配套緩沖液PRS(Phenolic Remove Solution)可以去除種子中的多糖多酚對RNA提取的影響。另外,試劑盒配套DNA清除柱,可以消除基因組DNA的污染。整個提取過程僅需20-30分鐘內即可完成,可以從50 mg植物種子中提取數十微克高純度RNA,基本沒有DNA和蛋白的污染,可用于Northern blot、Dot blot、polyA 篩選、體外翻譯、RNase 保護分析和分子克隆等實驗。

              已經測試的植物種子有:擬南芥干種子、小麥干種子、水稻干種子、芝麻種子、玉米干種子、豌豆種子、紅豆干種子、綠豆干種子、向日葵種子、西瓜種子、油莎豆、花生、大豆等。另外,該試劑盒也適合于提取塊莖、鱗莖的RNA。


              準備工作:

              1操作前在裂解液RSL中加入β-巰基乙醇至終濃度5%,如500 μl RSL中加入25 μl β-巰基乙醇。此裂解液最好現用現配。配好的 RSL4 ℃可放置3天。

              2 按照標簽所示在漂洗液RW中加入無水乙醇(自備),混勻后蓋緊瓶蓋后常溫貯存備用。

              3 準備65℃水浴

              4 所有離心步驟均在常溫下進行。

              操作步驟:

              1. 樣品處理:

              1.1 1.5 ml RNase-free離心管中加入500 μl裂解液RSL(使用前請先檢查是否已加入β-巰基乙醇),50 μl緩沖液PRS混勻備用。

                 注:緩沖液PRS有助于去除樣品中的多糖和多酚,禾本科植物如水稻,小麥和玉米的種子RNA提取中可以不用添加;如不能判斷材料是否含多糖和多酚,請加入緩沖液PRS。

              1.2將種子加入到液氮預冷的研缽中,用研杵研磨,其間不斷加入液氮,直至研磨成粉末狀。取20-50 mg粉末迅速加入到離心管中,渦旋劇烈震蕩混勻,65℃水浴放置5分鐘,間歇混勻。

              注:一定不要加入超過50 mg的粉末,否則樣品超過裂解液RSL的裂解能力導致RNA提取失敗。

              2. 離心取上清:

              13,000 rpm離心5 min,小心吸取收集管中的上清至1.5 ml RNase-free的離心管中,吸頭盡量避免接觸收集管中的細胞碎片沉淀。一般可獲得400 μl上清。

              注:一些種子富含油脂如花生種子,離心后脂肪位于最上層,用吸頭穿越脂肪層吸取上清;禾本科植物如水稻,小麥,玉米,高粱種子會有大量沉淀生產。

              3. 去除基因組污染:

              上清中加0.5倍體積的無水乙醇(如400 μl上清中加入200 μl無水乙醇),混勻(此時可能會出現沉淀),得到的溶液和沉淀一起轉入DNA清除柱CS(清除柱放入收集管中)中,13,000 rpm離心2分鐘,棄掉收集管中的廢液。

              注:吸附柱的最大容積是850 μl,超過此體積分步上柱,確保全部溶液都通過過濾柱,如果膜上有殘留液體,延長離心時間至5分鐘,保證膜上無殘留液體。

              4. 洗脫RNA

                將DNA清除柱放入2 m l RNase-free離心管中,在清除柱中加入500 μl 裂解液RL plus,13,000 rpm離心1分鐘,收集濾液(注意:RNA在濾液中,不要丟棄),濾液中加入250 μl無水乙醇,此時可能會出現沉淀,立即混勻,不要離心。

              5. RNA掛柱:

                將全部溶液加入到RNA吸附柱CR中(吸附柱放入收集管中),13,000 rpm離心2分鐘,棄廢液。

              注:確保溶液全部過濾到收集管中,膜上無殘留,如有必要,可以延長離心時間至5分鐘。

              6. 去除RNA中的蛋白污染:

              向RNA吸附柱CR中(吸附柱放入收集管中)加入500 μl 去蛋白液RD,13,000 rpm離心1分鐘,棄廢液。

              7. 去除RNA中的其他雜質:

              向RNA吸附柱CR中加入700 μl漂洗液RW(使用前請先檢查是否已加入乙醇), 13,000 rpm離心1分鐘,棄廢液。

              8. 進一步去除RNA中的其他雜質:

              向吸附柱CR中加入500 μl漂洗液RW (使用前請先檢查是否已加入乙醇),13,000 rpm離心1

              分鐘,棄廢液。

              9.  關鍵步驟:徹底去除吸附柱上的殘余乙醇:

              將吸附柱CR放回收集管中,確保蓋好吸附柱管蓋,13,000 rpm將吸附柱CR空甩離心2 分鐘,去除吸附柱上的殘余液體。

              注:此步驟目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除,如果有漂洗液殘留,可能會影響后續的RT等實驗操作。

              10. 洗脫得到RNA

              將RNA吸附柱CR轉入一個新的1.5 ml RNase-free離心管中,向吸附柱O型墊圈中央懸空加入50-100 μl RNase-free水(事先65℃預熱可提高洗脫效率),蓋好吸附柱管蓋,常溫放置2分鐘,13,000 rpm離心2 分鐘。

              注:確保水要加到膜的中央,不要貼壁加入;洗脫緩沖液體積不應少于50 μl,體積過小影響回收效率。

              11. RNA貯存:

              RNA樣品-80℃中保存。

              RNA產量和質量的評估:

              1. RNA產量:

              用分光光度計測定OD260的吸光值來計算RNA產量。將RNA按照一定的比例稀釋于TE溶液(10mMTris pH8.0,1mMEDTA)中,根據以下公式計算:

              A260×稀釋倍數×40=μg RNA/ml

              注:測定OD值時,盡量不要用RNase-free水稀釋RNA,因為RNase-free水pH較低,測定的OD值偏低。

              2. RNA質量:

              凝膠電泳檢測:凝膠電泳中,完整的RNA應該有兩條主帶:28S和18S,并且28S亮度應該與18S相當或是其亮度的2倍?梢允褂闷胀ǖ1×TAE瓊脂糖凝膠電泳,凝膠濃度1.5 %,可以使用高電壓,短時間電泳,如7V/cm電泳,20分鐘。建議使用D2000 DNA ladder(Cat:RTM415)作為Marker。植物28S rRNA遷移率與1500 bp類似,18S rRNA遷移率與1000bp類似。

              吸光值檢測:可以用A230,A260和A280的數值表示RNA的純度。純凈的RNA的 A260/A280比值應該為2,我們得到的RNA樣品比值應在1.8-2.2之間,如果比值低于1.8,表明RNA樣品中蛋白污染比較嚴重。

              A260/A230比值應該在2-2.2之間。如果此比值低于2,表明RNA樣品中有胍鹽,多糖的污染。


              實驗示例:


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