• <output id="rvd5t"><small id="rvd5t"></small></output>

        <tr id="rvd5t"></tr>

          1. <th id="rvd5t"><sup id="rvd5t"></sup></th>
            免費咨詢電話: 400-699-0631      點擊這里給我發消息
             
             
             
            產品分類
             
            ·PCR
             
             





            RTR2304 RealPure多糖多酚植物RNA提取試劑盒 含基因組清除柱
             產品貨號: RTR2304
             產品名稱: RTR2304 RealPure多糖多酚植物RNA提取試劑盒 含基因組清除柱
             產品價格/規格: 50次 1200元
             產品說明書: 點擊查看
             更新時間: 2022-06-07
            詳細信息   訪問次數:

            • 產品介紹
            • 發表文章
            • 相關產品
            • 質檢證書
            • RealPure Plant RNA Extraction Kit

              (for containing high polysaccharide and polyphenol components)

              RealPure多糖多酚植物RNA提取試劑盒

              ● 試劑盒內容及保存:

              試劑盒組成

              RTR2304-S

              5次)

              RTR2304-01

              50次)

              貯存方式

              裂解液RL

              5 ml

              30 ml

              常溫

              緩沖液PRS

              0.5 ml

              3 ml

              常溫

              裂解液RL plus

              3 ml

              30 ml

              常溫

              去蛋白液RD

              3 ml

              30 ml

              常溫

              漂洗液RW(濃縮液)

              1.5 ml

              首次使用按照標簽加入無水乙醇

              25 ml

              首次使用按照標簽加入無水乙醇

              常溫

              RNase-free

              1 ml

              5 ml

              4

              DNA清除柱CSRNase-free

              5

              50

              常溫

              RNA吸附柱CRRNase-free

              5

              50

              常溫

              收集管

              10

              100

              常溫

              2 ml離心管(RNase-free

              5

              50

              常溫

              1.5 ml離心管(RNase-free

              15

              150

              常溫

              說明書

              1

              1

               

              ● 儲存條件和效期:

              RNase-free水4℃保存;其他試劑在常溫(25℃左右)干燥條件下,可保存1年。試劑盒常溫運輸。

              ● 產品簡介:

              本試劑盒可從植物葉片、莖、幼苗、果肉中快速提取總RNA,可同時處理大量不同樣品。試劑盒配套緩沖液PRS(Phenolic Remove Solution)可以去除植物中的多糖多酚對RNA提取的影響。20-30分鐘內即可完成反應,提取的總RNA純度高,沒有DNA和蛋白的污染,可用于Northern blot、Dot blot、polyA 篩選、體外翻譯、RNase 保護分析和分子克隆等實驗。

              該試劑盒不能有效提取植物種子、塊莖、鱗莖的RNA,提取這些材料的RNA請選擇RealPure植物種子RNA提取試劑盒(Cat:RTR2308)。


              ● 準備工作:


              1操作前在裂解液RL中加入β-巰基乙醇至終濃度1%,如500 μl RL中加入5 μl β-巰基乙醇。此裂解液最好現用現配。配好的 RL4 ℃可放置3天。

              2 按照標簽所示在漂洗液RW中加入無水乙醇(自備),混勻后蓋緊瓶蓋后室溫貯存備用。

              3 所有離心步驟均在常溫下進行。

              ● 操作步驟:

              1. 樣品處理:

              1.1 1.5 ml離心管中加入500 μl裂解液RL(使用前請先檢查是否已加入β-巰基乙醇),50 μl緩沖液PRS混勻備用。

              注:多糖多酚植物(如銀杏,毛白楊等)加入RL后,要加入緩沖液PRS,普通植物(如擬南芥,小麥,水稻,煙草)可以不加緩沖液PRS。如果不能判斷植物是否為多糖多酚植物,請加入緩沖液PRS。

              注:快速判斷是否為多糖多酚植物:

              取20mg左右的植物材料,放入1.5 ml離心管中,加入0.5 ml 0.2 M NaOH溶液,95℃ 10分鐘,觀察裂解物顏色。顏色為綠色或淡黃色為普通植物;顏色為棕黃色或棕紅色為多糖多酚植物。

              1.2將植物材料加入到液氮預冷的研缽中,用研杵研磨,其間不斷加入液氮,直至研磨成粉末狀。取50 mg粉末迅速加入到離心管中,渦旋劇烈震蕩混勻,常溫放置5分鐘。

              注:一定不要加入超過50 mg的粉末,否則樣品超過裂解液RL的裂解能力會導致RNA提取失敗。

              2. 離心取上清:

              13,000 rpm離心5 min,小心吸取收集管中的上清至1.5 ml RNase-free的離心管中,吸頭盡量避免接觸收集管中的細胞碎片沉淀。一般可獲得400 μl上清。

              3. 去除基因組污染:

              上清中加入0.5倍體積的無水乙醇(如400 μl上清中加入200 μl無水乙醇),混勻(此時可能會出現沉淀),得到的溶液和沉淀一起轉入DNA清除柱CS(清除柱放入收集管中)中,13,000 rpm離心2分鐘,棄掉收集管中的廢液。

              注:確保全部溶液都收集到收集管中,如果膜上有殘留液體,延長離心時間至5分鐘,保證膜上無殘留液體。

              4. 洗脫RNA:

                將DNA清除柱放入一干凈的2 ml離心管中,在清除柱中加入500 μl 裂解液RL plus,13,000 rpm離心1分鐘,收集濾液(注意:RNA在濾液中,不要丟棄),濾液中加入250 μl無水乙醇,此時可能會出現沉淀,立即混勻,不要離心。

              5. RNA掛柱:

                將全部溶液加入到RNA吸附柱CR中(吸附柱放入收集管中),13,000 rpm離心2分鐘。

              注:確保溶液全部過濾到收集管中,膜上無殘留,如有必要,可以延長離心時間至5分鐘。

              6. 去除RNA中的蛋白污染:

              向RNA吸附柱CR中(吸附柱放入收集管中)加入500 μl 去蛋白液RD,13,000 rpm離心1分鐘,棄廢液。

              7. 去除RNA中的其他雜質:

              向RNA吸附柱CR中加入700 μl漂洗液RW(使用前請先檢查是否已加入乙醇), 13,000 rpm離心1分鐘,棄廢液。

              8. 進一步去除RNA中的其他雜質:

              向吸附柱CR中加入500 μl漂洗液RW (使用前請先檢查是否已加入乙醇),13,000 rpm離心1

              分鐘,棄廢液,將吸附柱CR放回收集管中,確保蓋好吸附柱管蓋。

              9.  關鍵步驟:徹底去除吸附柱上的殘余乙醇:

              13,000 rpm將吸附柱CR空甩離心2 分鐘,去除吸附柱上的殘余液體。

              注:此步驟目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除,如果有漂洗液殘留,可能會影響后續的RT等實驗操作。

              10. 洗脫得到RNA:

              將RNA吸附柱CR轉入一個新的1.5 ml RNase-free離心管中,向吸附柱O型墊圈中央懸空加入50-100 μl RNase-free水(事先65℃預熱可提高洗脫效率),蓋好吸附柱管蓋,常溫放置2分鐘,13,000 rpm離心2 分鐘。

              注:確保水要加到膜的中央,不要貼壁加入;洗脫緩沖液體積不應少于50 μl,體積過小影響回收效率。

              11. RNA貯存:

              RNA樣品-80℃中保存。

              ● RNA產量和質量的評估:

              1. RNA產量:

              用分光光度計測定OD260的吸光值來計算RNA產量。將RNA按照一定的比例稀釋于TE溶液(10mMTris pH8.0,1mMEDTA)中,根據以下公式計算:

              A260×稀釋倍數×40=μg RNA/ml

              注:測定OD值時,盡量不要用RNase-free水稀釋RNA,因為RNase-free水pH較低,測定的OD值偏低。

              2. RNA質量:

              凝膠電泳檢測:凝膠電泳中,完整的RNA應該有兩條主帶:28S和18S,并且28S亮度應該與18S相當或是其亮度的2倍?梢允褂闷胀ǖ1×TAE瓊脂糖凝膠電泳,凝膠濃度1-1.5 %,可以使用高電壓,短時間電泳,如7V/cm電泳,20分鐘。建議使用D2000 DNA ladder(Cat:RTM415)作為Marker。植物28S rRNA遷移率與1500bp類似,18S rRNA遷移率與1000bp類似。

              吸光值檢測:可以用A230,A260和A280的數值表示RNA的純度。純凈的RNA的 A260/A280比值應該為2,我們得到的RNA樣品比值應在1.8-2.2之間,如果比值低于1.8,表明RNA樣品中蛋白污染比較嚴重。A260/A230比值應該在2-2.2之間。如果此比值低于2,表明RNA樣品中有胍鹽,多糖的污染。


              實驗示例:




            TOP】【打印本頁】【關閉窗口



            中科瑞泰(北京)生物科技有限公司 版權所有 京ICP備12052607 網站管理   快遞查詢   IF查詢
            電話:010-58437227 免費電話:400-699-0631 傳真:010-57909566
            點擊這里給我發消息   內勤訂貨QQ:2446698252   技術支持QQ:460449375 電子郵箱:real-times@vip.163.com
            注意:公司所有產品僅供科研使用
            _×
            在線咨詢
            99久热精品免费观看_潮喷失禁大喷水av无码_中国女人free性hd_国产人A片视频在线播放