梯度凝膠生成系統

梯度膠生成系統通過自多板制膠器底部注入凝膠，可在多板凝膠灌膠器中灌制多達12塊厚度為0.75、1.0或1.5mm的凝膠。當灌制凝膠數少于12塊時，丙烯模塊可充當空間填充物。

多板制膠器兼容市面上多種玻璃板，如伯樂短板和長板玻璃以及U型板玻璃。

系統由三部分組成：

梯度生成系統：梯度混合儀

傳動系統：蠕動泵

制膠系統：多板制膠器

一 開箱后確認包裝包含以下配件

梯度生成系統：

帶接頭硅膠管一根（1米）；磁力攪拌子2個；梯度混合儀一個，藍色閥門一個。

傳動系統：

蠕動泵一個（帶硅膠管和接頭）；電源一個；硅膠管（不帶接頭）60 cm。

制膠系統：

多板制膠器一個；分隔片 20個；填充塊5片；藍色閥門一個。

二 使用說明：

1 按照圖示將系統連接：

將帶接頭的硅膠管一端插入到梯度混合儀側方插口，另一端與蠕動泵下方硅膠管接頭連接（蠕動泵溶液方向是一般為下進上出）。藍色閥門插入到多板制膠器接口，將不帶接頭硅膠管截取適當長度一端與藍色閥門連接，另一端與蠕動泵上方硅膠管接頭連接。藍色閥門旋鈕方向與硅膠管平行為開啟，旋轉至與硅膠管垂直方向為關閉。梯度混合儀左側桿狀旋鈕與地面垂直為開啟，旋轉與水平面有夾角為關閉。

2 蠕動泵使用方法：

按照圖示調節蠕動泵。灌裝速度不要太快。

 3 梯度膠配制：

梯度混合儀加入溶液前，首先把梯度混合儀閥門關閉（旋轉旋鈕與水平面有夾角為關閉）。

加入溶液原則：左槽（靠近旋鈕閥門）加高濃度溶液；右槽（靠近出口）加低濃度溶液。

將磁力攪拌子放入右槽中，打開磁力攪拌器，轉動轉子。

按照下表配制溶液，以制備4-20% SDS-PAGE 厚度1.0mm梯度膠為例：

4 多板制膠器使用：

使用前將多板制膠器填充塊兩側的保護膜揭掉；

準備好制膠用的厚玻片和短玻片。

將厚玻片和短玻片對齊并在短玻片前方放一張分隔片，此為一套玻板三明治組合；

將多板灌膠器放倒，以厚玻板在下的方式放入玻板三明治組合，最多可放12套；

插入密封擋板，在最后一塊填充塊或者最后一組玻板組合前插入適量的分隔片以保證玻板和填充塊壓緊，然后擰緊螺絲。

在密封擋板下面小孔插入閥門，并打開閥門（閥門旋鈕與硅膠管平行為開啟）。

5 灌膠操作：

重要步驟：

灌膠前事先檢查：梯度混合儀旋鈕是否為開啟狀態（桿狀旋鈕與水平面垂直為開啟）

磁力攪拌子是否轉動

蠕動泵是否為關閉狀態

多板制膠器藍色閥門是否為開啟狀態（藍色旋鈕與硅膠管平行為開啟）

檢查無誤后，打開蠕動泵，使用a模式，調節數字為25，開始灌膠操作。至多板制膠器中的溶液至頂部接近溢出時，首先關閉多板制膠器藍色閥門（旋鈕與硅膠管垂直為關閉）；

暫停蠕動泵；迅速在梯度混合儀左右槽中加滿蒸餾水，打開蠕動泵，徹底沖洗管道。

注：次步驟非常重要，不立即徹底沖洗，殘余的凝膠會堵塞梯度混合儀和管道。

仔細插入梳子，盡量一次成功，避免產生氣泡。

25℃ 下凝固40-60分鐘。

注：凝固溫度非常關鍵，當室內溫度低于20度時，凝固時間可以延長到90分鐘�？梢允褂脺叵淇販氐�25度凝固。

6 拆膠：

待凝膠凝固好后，打開多板制膠器螺絲，用膠鏟在兩板之間輕輕撬動，注意不要誤撬玻璃短板，否則將導致玻璃板和膠之間產生氣泡，使得凝膠無法使用。用水將每板凝膠沖洗干凈，自封袋封好，加入2 ml  1×電泳緩沖液保持潤濕，4℃水平放置，可以貯存3-4周。