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            RTE4102 DNA尿素PAGE電泳試劑盒
             產品貨號: RTE4102
             產品名稱: RTE4102 DNA尿素PAGE電泳試劑盒
             產品價格/規格: 60次 600元
             產品說明書: 點擊查看
             更新時間: 2022-03-22
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            • TBE-尿素-PAGE電泳可以選擇RTM501 單鏈DNA Marker(25-75 nt)作為分子量標準。 


              DNA尿素PAGE電泳試劑盒(貨號RTE4102  

                                   DNA Urea PAGE Electrophoresis Kit

              產品組成: 

              貨號

              名稱

              規格

              保存條件

              AC2914

              40%PAA(29:1)

              100 ml

              4

              TB001

              5×TBE

              500 ml

              RT

              RU5080

              尿素(電泳級)

              220 g

              RT

              AP020P

              APS(干粉)

              5 ml

              RT (配制后-20貯存)

              TA0761

              TEMED

              0.5 ml

              4,避光

              DL080

              2×TBE尿素上樣緩沖液 (尿素變性膠)

              1 ml

              4

              產品簡介:

              DNA尿素 PAGE 電泳是研究寡核苷酸電泳的重要研究手段?梢詸z測2-500堿基的寡核苷酸片段,理論上可以分辨出相差一個核苷酸的片段。

              本公司提供的DNA尿素PAGE電泳試劑盒包含凝膠制備及電泳所需的全部試劑,用戶只需自備制膠器具和蒸餾水,即可配制各種濃度的PAGE膠,使用方便。

              按照每次制備7 ml 8%凝膠(大小10×8cm,1mm厚度)計算,試劑盒可使用至少60次。

              貯存和運輸:

                  試劑盒按照標簽溫度貯存,有效期一年。試劑盒常溫運輸。

              使用說明:

              一、制備凝膠:

              10% APS配制-5 ml

              將0.5 gAPS干粉溶于5 ml滅菌水中,徹底溶解后分裝,1 ml/支,-20℃備存,每次取一管使用。10% APS應盡量減少室溫存放時間,以防失效。10%APS在4℃有效期為一周,-20℃有效期6個月。若發現凝膠聚合時間延長,應考慮更換使用-20度保存的10% APS。

              1.1.參照凝膠模具說明書,裝配好凝膠模具。

              1.2.分離膠配制:根據表格一,將不同體積的成分混合,漩渦攪拌至尿素徹底溶解。

              表一 TBE-尿素PAGE分離膠配方表 (總體積5 ml,適用于厚度1.0 mm小板膠)

              單鏈DNA長度

              最佳凝膠濃度

              尿素(克)

              40%PAA

              29:1

              5×TBE

              補水到總體積

              10%APS

              TEMED

              200-1000 nt

              5%

              2.1

              0.625 ml

              1 ml

              5 ml

              50 μl

              5 μl

              50-400 nt

              8%

              2.1

              1 ml

              1 ml

              5 ml

              50 μl

              5 μl

              30-300 nt

              10%

              2.1

              1.25 ml

              1 ml

              5 ml

              50 μl

              5 μl

              10-150 nt

              15%

              2.1

              1.875 ml

              1 ml

              5 ml

              50 μl

              5 μl


              1.3在凝膠模具中灌入適量分離膠溶液(對于mini-gel,凝膠液加至約距前玻璃板頂端1.5 cm或距梳齒約0.5 cm即可),然后在分離膠溶液上輕輕覆蓋一層1-5 cm的水層,使凝膠表面保持平整。

              1.4靜置10-20分鐘,待分離膠和水層之間出現一個清晰的界面后,說明凝膠已聚合。

              注:凝膠的聚合時間與環境溫度有關。夏天溫度較高時,聚合較快;冬天氣溫低時,聚合時間會延長?梢愿鶕h境溫度的不同調節APS的加入量。

              1.5去除覆蓋在分離膠上的水層;按照表二將不同體積成分在一個小燒杯中混合;最后加入10%過硫酸銨和TEMED,輕輕攪拌使其混勻,避免產生氣泡。

              表二 TBE-尿素PAGE 4%濃縮配方表 (總體積2 ml,適用于1.0mm厚度膠)

              各組份體積(ml

              凝膠濃度

              尿素

              40%PAA29:1

              5×TBE

              滅菌水

              10%APS

              TEMED

              4%

              0.84

              0.2 ml

              0.4 ml

              補水至體積2 ml

              20 μl

              2 μl

              1.6將濃縮膠溶液加至分離膠的上面,直至凝膠溶液到達前玻璃板的頂端;將梳子插入凝膠內,避免產生氣泡。

              1.7靜置30-60分鐘,等待濃縮膠聚合。

              注:凝膠的聚合時間與環境溫度有關。夏天溫度較高時,聚合較快;冬天氣溫低時,聚合時間會延長?梢愿鶕h境溫度的不同調節APS的加入量。

              二、電泳:

              2.1. 預電泳:拔出梳子,1×TBE緩沖液徹底沖洗加樣孔2-3次,去除殘余的尿素。電泳槽內外加入適量1×TBE緩沖液穩壓200 V預電泳30分鐘。

              注:試劑盒配套的5×TBE緩沖液僅夠配制凝膠用,1×TBE電泳緩沖液請自己制備,配方如下:

              終濃度

              順序

              原料

              1

              5

              89 mM

              1

              Tris [MW121.14]

              10.8

              54

              2 mM

              2

              EDTA 2Na·2H2O [MW372.24]

              0.744

              3.72

              89 MM

              3

              硼酸 [MW61.83]

              5.5

              27.5

               

              4

              超純水最后定容至

              1

              5

               

               

              最后pH8.2-8.3之間,可以不用調節pH,記錄每批pH

              2.2. 取 3-5 μl樣品,加入等體積2×TBE尿素上樣緩沖液,70℃處理5 分鐘后立即冰浴,上樣。

              2.3.  連接電源線,打開電源開關,按照以下條件電泳。

               

              恒電壓

              起始電流

              結束電流

              電泳時間

              適用條件

              推薦電壓

              200V

              15-20 mA/板膠

              10-15 mA/板膠

              60+ min

              最佳電壓,最優的分辨率

              2.4.  等待上樣緩沖液的溴酚藍指示前沿到凝膠底部時終止電泳,取出凝膠進行后續實驗。

              三、染色:

              3.1 單鏈DNA可以用單鏈DNA PAGE電泳染色試劑盒(貨號:RTS5103),核酸PAGE電泳染色試劑盒(貨號:RTS5102)或核酸快速銀染試劑盒(貨號:RTS5101)進行染色。




              實驗示例:

              1.    使用單鏈DNA PAGE電泳染色試劑盒(貨號:RTS5103)染色:

                                       

               

              2.    使用核酸PAGE電泳染色試劑盒(貨號:RTS5102)染色:

                                



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