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            Anti-GAPDH抗體 (兔多抗)
             產品貨號: RGA1040
             產品名稱: Anti-GAPDH抗體 (兔多抗)
             產品價格/規格: 20μl 300元
             產品說明書: 點擊查看
             更新時間: 2022-06-07
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            • Anti-GAPDH抗體(兔多抗)

              Anti-GAPDH Antibody(Polyclonal Antibody from Rabbit)

              產品編號

              產品名稱

              規格

              RGA1040

              Anti-GAPDH抗體(兔多抗)

              20 μl

              產品簡介

              甘油醛-3- 磷酸脫氫酶( Glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase,GAPDH) 是糖酵解(glycolysis)過程中的關鍵酶,分子量為37 kDa左右。它催化甘油醛-3-磷酸的氧化磷酸化反應。GAPDH 作為管家基因在同種細胞或者組織中一般是恒定、高水平表達的,常用作Western Blot實驗的內參照。

              來源

              用途及稀釋比例

              抗體類型

              GAPDH分子量

              Rabbit

              WB 1:2000-5000

              IHC 1:200-1000

              IF 1:200-1000

              多克隆抗體

              36-38 kD

              注:WB, Western blot; IP, Immunoprecipitation; IF, Immunofluorescence

              本抗體如果用于常規的Western檢測,至少可以檢測20次。

              貯存形式:

              穩定溶液,1 mg/ml 抗體溶于PBS,50%甘油,pH7.2。

              保存及運輸條件:

              -20℃保存,一年有效;避免反復凍融;濕冰運輸。

              使用說明:

              1. Western Blot雜交(ECL顯色):1:2000-5000稀釋,常溫孵育1-2 h或4℃過夜。

              2. 免疫熒光(IF)和免疫組化(IHC):1:200-1000稀釋。

               實驗示例:

               Jurkat總蛋白,細胞漿蛋白,細胞核蛋白GAPDH檢測

              總蛋白提。4×106 Jurkat細胞,2000 g 離心收集,去上清,沉淀中加入200 μl RIPA(加2 μl 100 mM PMSF),冰上裂解5分鐘,4℃ 16000 g 15 分鐘,上清即為總蛋白(TP)。

              細胞漿蛋白:4×106 Jurkat細胞,2000 g 離心收集,加入400 μl細胞漿蛋白抽提試劑A(加4 μl 100mM PMSF,加0.4 μl 1 M DTT),懸浮沉淀,冰浴15分鐘;加入20 μl細胞漿蛋白抽提試劑B,混勻,冰上孵育1分鐘,震蕩5秒,4℃ 16000g 10分鐘,小心收集上清即為細胞漿蛋白(C-Pr),不要觸及沉淀。

              細胞核蛋白提。沉淀用200 μl 1×PBS漂洗一次,4℃ 16000 g 2分鐘;沉淀中加入200 μl 細胞核蛋白抽提試劑(加2 μl 100mM PMSF,加0.2 μl 1 M DTT),重懸沉淀,劇烈震蕩15秒,冰浴40分鐘,每間隔10分鐘劇烈震蕩15秒;4℃ 16000 g 5分鐘,上清即為細胞核蛋白(N-Pr)。

              電泳:RTD6132-15%3.3C  200V 33-12 mA 55 min

              轉膜:NC膜,1×RealBlot快速轉膜液濕轉,穩流400 mA,電壓變化64-57 V,轉膜時間35 min

              封閉:無蛋白快速封閉液RT 20 min

              一抗孵育:GAPDH 羊抗兔多抗,一抗稀釋液稀釋1:2000

              二抗孵育:羊抗兔IgG-HRP,二抗稀釋液稀釋1:5000

              檢測:ECL發光檢測


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